| 出品公司: | ZYbscience |
|---|---|
| 载体名称: | pCMV6-Entry |
| 质粒类型: | 哺乳动物表达载体;克隆载体;体外转录载体 |
| 高拷贝/低拷贝: | 高拷贝 |
| 克隆方法: | 限制性内切酶,多克隆位点 |
| 启动子: | CMV |
| 载体大小: | 4919 bp |
| 5' 测序引物及序列: | CMV fwd 5’CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG 3’ |
| 3' 测序引物及序列: | hGH pA rev 5’CCAGCTTGGTTCCCAATAGA 3’ |
| 载体标签: | Flag tag (C ter) |
| 载体抗性: | 氨苄青霉素 |
| 筛选标记: | 新霉素(Neomycin) |
| 克隆菌株: | DH5α 等 |
| 宿主细胞(系): | 常规细胞系(293、CV-1、CHO等) |
| 备注: | -- |
| 产品目录号: | ZY100001 |
| 稳定性: | 稳表达 |
| 组成型/诱导型: | 组成型 |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃低温保存
- 保质期:
三年
- 英文名:
pCMV6-Entry
- 库存:
20
- 供应商:
泽叶生物
载体基本信息
载体质粒图谱和多克隆位点信息
载体简介
载体序列
>pCMV6-Entry AACAAAATATTAACGCTTACAATTTCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCT TCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACG ACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGCCAAGCTGATCTATACATTGAATCAATATTGGCAATTAGCCATATTAGTCATTGGTT ATATAGCATAAATCAATATTGGCTATTGGCCATTGCATACGTTGTATCTATATCATAATATGTACATTTATATTGGCTCA TGTCCAATATGACCGCCATGTTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAG CCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGA CGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAA ACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTCCGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGC CTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTACGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCA TGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACACCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATT GACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAATAACCCCGCCCCGTTGACGCA AATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGAATTTTGTAATACGAC 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文献和实验之前转染HEK293作为预实验,已经用WB证明有效,你之后的wb有没阳性对照呢或者说用HEK293作为对照呢 birkin chenhaombb wrote: 你用的什么载体啊?稳定转染的?怎么用G418筛选啊,费时费力,直接病毒转 用的pCMV6Entry,已经是慢病毒载体了……就是因为这种细胞转染率太低(据师姐说大概15%)不得已才做稳定转染,想说看看能不能让转染率上来一点
是最容易的方法。扩增你的基因,在其N-末端含有attB1位点,C-末端含有attB2位点。网站上有链接到GATEWAY信息,你通过点击按键即可在你的引物上按顺序加上att位点。你可以利用限制性内切酶和连接酶将你的基因克隆到Entry Vectors中或者购买已包含attB载体的cDNA文库(PCMV.SPORT6或PSPORT-P)。 为什么你们推荐在PCR引物中加上attB位点并且转化PCR产物到一个供体载体中,然后被重组(与attL)进attR位点?为什么PCR
Gateway也可以被视为一种克隆操作平台:把目的基因克隆到入门载体(Entry Vector)后,就不用依赖限制性内切酶,而靠载体上存在的特定重组位点和重组酶,高效、快速地将目的基因克隆到其它的受体载体(Destination Vector,目的载体)上。Gateway的原理也是建立在噬菌体DNA定点整合到细菌宿主基因组上。在噬菌体和细菌的整合因子(INF、Int)的作用下,lambda的attP位点和大肠杆菌基因组的attB位点可以发生定点重组,lambda噬菌体DNA整合到大肠杆菌的基因
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