| 出品人: | ZYbscience |
|---|---|
| 载体名称: | pMKO.1-puro |
| 质粒类型: | 逆病毒载体;RNAi载体 |
| 高拷贝/低拷贝: | 低拷贝 |
| 克隆方法: | 限制性内切酶,多克隆位点 |
| 启动子: | U6 |
| 载体大小: | 6340 bp |
| 5' 测序引物及序列: | pLXSN 5' primer 5' CCCTTGAACCTCCTCGTTCGACC3' |
| 3' 测序引物及序列: | pBABE 3' primer 5'ACCCTAACTGACACACATTCC3' |
| 载体标签: | 无 |
| 载体抗性: | 氨苄青霉素 |
| 筛选标记: | 嘌呤霉素 |
| 克隆菌株: | DH5α、HB101等 |
| 宿主细胞(系): | 常规哺乳动物细胞系 |
| 备注: | 推荐使用逆病毒包装载体: 。 |
| 产品目录号: | ZY8452 |
| 稳定性: | 稳表达 |
| 组成型/诱导型: | 组成型 |
| 病毒/非病毒: | 逆转录病毒 |
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃低温保存
- 保质期:
三年
- 英文名:
pMKO.1-puro
- 库存:
20
- 供应商:
泽叶生物
载体基本信息
载体质粒图谱和多克隆位点信息


载体简介
载体序列
LOCUS pMKO.1-puro Sequencing Result 6340 bp DNA SYN
DEFINITION pMKO.1 puro Sequencing Result
ACCESSION
KEYWORDS
SOURCE
ORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors.
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6340
/organism="pMKO.1 puro Sequencing Result"
/mol_type="other DNA"
promoter 10..242
/label="hU6_promoter"
misc_feature 172..191
/label="LKO1_5_primer"
misc_feature complement(305..325)
/label="pBABE_3_primer"
misc_feature complement(311..526)
/label="SV40_enhancer"
promoter 323..591
/label="SV40_promoter"
rep_origin 490..567
/label="SV40_origin"
misc_feature 552..571
/label="SV40pro_F_primer"
CDS complement(625..1299)
/label="ORF frame 2"
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DAREEEFLQLGDPLDVAVRIDGVARGGVVGERGGEGAYGPGDVVAGGEAHRGLVLGHG
KLFAKA*"
gene 649..1248
/label="puro (variant)"
/gene="puro (variant)"
/translation="MGSCAPFGRALRVVGRASGTGLAGHAPGARSFGHLDVGGDGEAE
PLVEGEVAGRGGLQEGGHPGALGRLHSGEHDGAAQTLALVVGRDADGGQEPRGLLGPV
RRQEAFHLLLRGQPGTAQLGHARADLGEHRPRFDALRRGPDRHRGAVVRDPHLADVEP
DAREEEFLQLGDPLDVAVRIDGVARGGVVGERGGEGAYGPGDVVAGGEAHRGLVLGHG
KLFAKA*"
CDS 649..1248
/label="ORF frame 1"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIE
RVTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSR
LAAQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFL
ETSAPRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA*"
misc_feature complement(1972..1994)
/label="pGEX_3_primer"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIE
RVTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSR
LAAQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFL
ETSAPRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA*"
misc_feature complement(2130..2150)
/label="pBABE_3_primer"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIE
RVTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSR
LAAQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFL
ETSAPRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA*"
misc_feature complement(2136..2351)
/label="SV40_enhancer"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIE
RVTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSR
LAAQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFL
ETSAPRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA*"
promoter 2148..2416
/label="SV40_promoter"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIE
RVTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSR
LAAQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFL
ETSAPRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA*"
rep_origin 2315..2392
/label="SV40_origin"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIE
RVTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSR
LAAQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFL
ETSAPRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA*"
misc_feature 2377..2396
/label="SV40pro_F_primer"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIE
RVTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSR
LAAQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFL
ETSAPRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA*"
gene complement(3516..4376)
/label="Ampicillin"
/gene="Ampicillin"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIE
RVTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSR
LAAQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFL
ETSAPRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA*"
CDS complement(3516..4376)
/label="ORF frame 3"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGY
IELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVE
YSPVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRL
DRWEPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPL
LRSALPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIA
EIGASLIKHW*"
promoter complement(4418..4446)
/label="AmpR_promoter"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGY
IELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVE
YSPVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRL
DRWEPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPL
LRSALPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIA
EIGASLIKHW*"
promoter 4668..5244
/label="CMV_immearly_promoter"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGY
IELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVE
YSPVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRL
DRWEPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPL
LRSALPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIA
EIGASLIKHW*"
misc_feature 4732..5426
/label="5_LTR"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGY
IELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVE
YSPVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRL
DRWEPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPL
LRSALPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIA
EIGASLIKHW*"
misc_feature 4747..5034
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文献和实验1.常用载体分类:2,常用载体元件介绍:(1) 启动子:启动子是位于结构基因5'端上游的DNA序列,能活化RNA聚合酶,使之与模板DNA准确的结合并具有转录起始的特异性。启动子主要分为广谱启动子和特异性启动子。广谱启动子为在各种组织、细胞上广泛表达的启动子;特异性启动子为在特异性组织或者细胞类型上表达的启动子。常用广谱启动子有CAG,CMV,EF1a,PGK等,还包含启动RNA的III型启动子U6和H1启动子;常用特异性启动子如成熟神经元特异性启动子hSyn,投射神经元特异性启动
型质粒 (3)必需具备一个以上的酶切位点,有选择的余地; (4)必需有易检测的标记,多是抗生素的抗性基因,不特指多位 Ampr(试一试)。 (5)满足自己的实验需求,是否需要包装病毒,是否需要加入荧光标记,是否需要加入标签蛋白,是否需要真核抗性(如Puro、G418)等等。 无论选用哪种载体,首先都要获得载体分子,然后采用适当的限制酶将载体 DNA 进行切割,获得线性载体分子,以便于与目的基因片段进行连接。 如何阅读质粒图谱 第一步:首先看 Ori 的位置,了解质粒的类型(原核/真核
【求助】怎样判断在一个细胞中同时了导入两个含GFP标记的慢病毒过表达载体?感谢高手指点!
),但这样我又担心导进去后基因不一定都表达,担心会不会受其他调控表达的机制的影响,比如甲基化等表观遗传学的影响。 希望哪位高手能为在下指点迷津,非常感激! kinguangjun 你好!你可以一个慢病毒过表达载体用GFP,另一个慢病毒过表达载体用RFP来标记,这样就可以解决你的问题。 zhujoker 你其实可以使用一个带GFP的,一个带PURO抗性的载体不就ok了?两个放在一起也是可以的,其实应该说是更好,因为其表达
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