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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
常温
- 保质期:
三年
- 英文名:
pAcGFP1-Mem
- 库存:
60
- 供应商:
信裕生物
基本信息
| 质粒类型: | 荧光蛋白报告载体 |
|---|---|
| 载体大小: | 4787 bo (查看载体序列) |
| 载体抗性: | Kanamycin |
| 筛选标记: | Neomycin / G418 |
| 报告基因: | AcGFP1 |
订购信息
| 产品编号 | 产品名称 | 规格 | 价格 |
|---|---|---|---|
| XY8021 | pAcGFP1-Mem | 5ug质粒 |
¥1500.00 |
质粒图谱
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文献和实验内切酶,为了考虑后期实验的方便性,通常会选择一个酶切效率高的酶比如说BamH1 EcoR1,另一个效率相对较低的,比如说Not 1, Kpn1。这四种我都用过,如果buffer不一样的,可以先切效率低的再切效率高的,中间切胶纯化。当然酶切效率跟载体本身结构也有关系,我用过的载体有pGBKT7,pGADT7,pEF4VH,pSeqTaq,Prolabel,pAcGFP,pTRE。其中pTRE没有成功过。2 插入片段的处理 使用高保真的酶扩增插入片段,我用过TaKaRa的primesSTAR GXL DNA
酶(RdRp) 作用下以靶mRNA 为模板合成dsRNA ,后者可被降解形成新的siRNA ;新生成的siRNA又可进入上述循环。新生的dsRNA 反复合成和降解,不断产生新的siRNA ,从而使靶mRNA 渐进性减少,呈现基因沉默现象. RNA干扰实验 将制备好的siRNA和其表达载体转导至真核细胞中的方法主要有以下几种:磷酸钙共沉淀、电穿孔法、 DEAE- 葡聚糖和 polybrene 、机械法(显微注射和基因枪)、阳离子脂质体试剂,其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染
蛋白表达分析的金标准方法:WB(Western Blot)实验解析
融合,遗传物质的直接细胞质释放,绕过内体区室化。②内体融合逃逸:通过胞吞进行内部吞,与内体膜融合,基因货物的受控释放,膜合并保持隔间完整性。③内体破裂通路:脂质的pH依赖性电离,渗透压积累,内体膜不稳定和破裂,囊泡内容物的批量释放。 图一 脂质基因递送载体的结构及细胞进入机制[4] 优势:操作温和、细胞毒性可控;贴壁/悬浮细胞通用;商业化试剂盒成熟、重复性好;无需专用设备;适配瞬时转染快速制备哺乳表达的重组蛋白、膜蛋白。 2. PEI聚Et亚胺转染 高分子阳离子聚合物递送核酸,适配大规
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