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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
长期
- 英文名:
M-MuLV Reverse Transcriptase
- 库存:
560
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
2000U
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销售北京M-MuLV反转录酶(逆转录酶)报价,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京M-MuLV反转录酶(逆转录酶)报价
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
英文名:M-MuLV Reverse Transcriptase
编号:YT392
规格:2000U
本品是一种经过改造和优化的M-MuLV反转录酶(RNase H-)。和普通的M-MuLV反转录酶相比,M-MuLV反转录酶(RNase H-)也是一种依赖于RNA或DNA模板的DNA聚合酶,可以以RNA或DNA为模板在引物存在的情况下完成互补DNA链的合成;但缺失了Ribonuclease H(RNase H)酶活性,不能够选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA。M-MuLV反转录酶(RNase H-)是最常用的反转录酶之一。
特点:M-MuLV反转录酶(RNase H-)可以合成长达13kb的cDNA,而普通的M-MuLV反转录酶(RNase H-)仅能合成长达9kb的cDNA;M-MuLV反转录酶(RNase H-)的最适反应温度为42-45℃并且在55℃时仍然有很高活性,可以避免普通的M-MuLV反转录酶(RNase H-)在37℃反应时的一些不足。
用途:M-MuLV反转录酶(RNase H-)常用于在获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成。M-MuLV反转录酶(RNase H-)合成的cDNA第一条链后续可以用于PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成等。M-MuLV反转录酶(RNase H-)也可以用于DNA探针的标记,通过引物延伸(primer extention)来分析RNA,以及用于基因芯片荧光探针的标记。
来源:本M-MuLV反转录酶(RNase H-)由大肠杆菌表达,表达的基因为经过突变优化的编码Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase的pol基因片段。
活性定义:One unit of the enzyme incorporates 1 nmol of dTMP into a polynucleotide fraction in 10 min at 37℃. Enzyme activity is assayed in 50 mM Tris-HCl(pH 8.3), 6 mM MgCl2, 10 mM DTT, 40 mM KCl, 0.5 mM dTTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP, 0.4 mM polyA·oligo(dT)12-18。
纯度:不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶,可以满足常规反转录合成cDNA第一条链等的需要。
酶储存溶液:50 mM Tris, pH 8.3, 100mM NaCl, 1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0.1% Triton X-100 and 50% glycerol。
Reaction Buffer(5X):250 mM Tris, pH 8.3 at 25℃, 250 mM KCl, 20 mM MgCl2, 50 mM DTT。
失活或抑制:70℃孵育10分钟可以导致M-MuLV反转录酶(RNase H-)失活;EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对M-MuLV反转录酶(RNase H-)有抑制作用。
本产品中M-MuLV反转录酶(RNase H-)的浓度为200U/μl,用于体积为20微升的反转录体系时足够进行10次反转录反应。
储存条件:-20℃。
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·碱性磷酸酶标记链霉亲和素
编号:YT853
英文名称:AP-labeled Streptavidin
规格:0.2ml
本品为碱性磷酸酯酶标记链霉亲和素,可以用于生物素(Biotin)标记的抗体、核酸、蛋白或其它生物素标记分子的检测。具体用途包括Western、ELISA、免疫组化或免疫细胞化学、原位杂交、Southern、Northern、EMSA等。
本AP-Streptavidin用高纯度的Streptavidin和超纯的碱性磷酸酯酶交联而成,确保产生极低的本底和非常高的灵敏度。本产品的浓度为1mg/ml。
Streptavidin的分子量为66kD,可以高度特异性地和生物素(Biotin)结合。Streptavidin和生物素的亲和常数为Kd=10-15M。Streptavidin是一个4聚体蛋白,可以同时结合4个生物素分子。Streptavidin的中文名为链霉亲和素,从Streptomyces adidinii中纯化获得,和鸡蛋清来源的Avidin(亲和素)在空间结构以及与生物素的亲和力方面具有高度的相似性。和Avidin不同的是,Streptavidin是一种非糖基化蛋白,并且基本不带电荷。Avidin的pI=~10.5,在中性pH条件下呈碱性。由于Streptavidin和Avidin相比在中性条件下不带电荷,因此Streptavidin的非特异性结合比Avidin低很多,这样检测时的非特异性背景就低很多。因此目前在生物素检测时通常使用Streptavidin替代Avidin。
碱性磷酸酯酶(Alkaline Phosphatase, AP/ALP/AKP/ALKP/ALPase/Alk Phos)常被称作碱性磷酸酶(EC 3.1.3.1),是一类水解酶,通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去,并生成磷酸根离子和自由的羟基,其去磷酸化作用的底物包括蛋白质、核苷酸和生物碱等,并在碱性条件下最为有效。该酶是一组同功酶的统称。常见的小牛肠碱性磷酸酶(Calf Intestinal Alkaline Phosphatase, CIAP/CIP)被广泛用于二抗等的标记最终用于蛋白和核酸等的检测,例如在Western、ELISA、IHC、ICC、EMSA、Northern、Southern等时,催化BCIP/NBT等显色试剂显色或催化适当的化学发光试剂产生化学发光。本产品标记的就是小牛肠碱性磷酸酶。
本碱性磷酸酯酶标记Streptavidin用于各种常规用途的推荐稀释比例如下,实际实验操作过程中需根据具体情况适当调节碱性磷酸酯酶标记Streptavidin的稀释比例。对于Western,推荐的稀释范围为1:2000-10000。
WB:1:2000-5000
IHC/IC/ISH:1:150-500
ELISA:1:2000-5000
Southern/Northern:1:2000-5000
EMSA:1:2000-5000
储存条件:-20℃,有效期一年。
北京M-MuLV反转录酶(逆转录酶)报价关键词:逆转录酶,YT392,M-MuLV反转录酶(逆转录酶),M-MuLV Reverse Transcriptase
·总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)
编号:YT312
英文名称:Total Antioxidant Capacity Assay Kit with FRAP method
规格:100次
本试剂盒是一种采用Ferric Reducing Ability of Plasma(FRAP)方法,可以对血浆、血清、唾液、尿液等各种体液,细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力进行检测的试剂盒。本试剂盒可以检测100个样品。
试剂盒组份:
TPTZ稀释液——————15ml
TPTZ溶液———————1.5ml
检测缓冲液——————1.5ml
FeSO4•7H2O——————200mg
Trolox溶液 (10mM)———0.1ml
活性氧ROS主要包括羟基自由基、超氧自由基和过氧化氢。在细胞或组织的正常生理代谢过程中会产生活性氧,同时一些环境因子例如紫外照射、γ射线照射、吸烟、环境污染等也可以诱导活性氧的产生。活性氧产生后,可以导致细胞内脂、蛋白和DNA等的氧化损伤,诱发氧化应激(Oxidative stress),继而导致各种肿瘤、动脉粥样硬化、风湿性关节炎、糖尿病、肝损伤、以及中枢神经系统疾病等。
机体中存在多种抗氧化物,包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等,可以清除体内产生的各种活性氧,以阻止活性氧诱导的氧化应激(oxidative stress)的产生。一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总的水平即体现了该体系内的总抗氧化能力。因此测定血浆、血清、尿液、唾液等各种体液,细胞或组织等裂解液中的总抗氧化能力具有非常重要的生物学意义。
植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力的检测可以用于检测各种溶液的抗氧化能力的强弱,可以用于筛选强抗氧化能力的药物。
FRAP法测定总抗氧化能力的原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric-tripyridyltriazine(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ,随后在593nm测定蓝色的Fe2+-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。由于反应在酸性条件下进行,可以抑制内源性的一些干扰因素。并且由于血浆等样品中的铁离子或亚铁离子的总浓度通常低于10μM,因此血浆等样品中的铁离子或亚铁离子不会显著干扰FRAP法的检测反应。由于反应体系中的铁离子或亚铁离子是和TPTZ螯合的,样品本身含有的少量金属离子螯合剂通常也不会显著影响检测反应。

本试剂盒提供了抗氧化物Trolox作为对照。Trolox是一种维生素E的类似物,水溶性较好,抗氧化能力和维生素E相近。本试剂盒方便快捷,加入待测样品后3-5分钟即可进行吸光度测定,通常10-20个样品可以在十多分钟内检测完毕。
注意事项:
1. 在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂会对本试剂盒的检测产生干扰,需尽量避免。
2. 如果样品中含有外加的较高浓度的铁盐或亚铁盐,会干扰测定。但血浆、血清、细胞或组织裂解液等样品中含有的微量的铁盐或亚铁盐不会干扰测定。
3. 样品中不能添加DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的物质,也不宜添加Tween、Triton和NP-40等去垢剂。
4. 测定时需可以测定A593的酶标仪一台(测585-605nm也可以)或可以测定微量样品的分光光度计一台。
5. TPTZ对人体有刺激性,请注意适当防护。
储存条件:-20℃,有效期12个月。
北京M-MuLV反转录酶(逆转录酶)报价关键词:逆转录酶,YT392,M-MuLV反转录酶(逆转录酶),M-MuLV Reverse Transcriptase
·HDAC5抗体
编号:YT794
英文名称:anti-HDAC5 antibody
规格:>20次
本抗体是用经过适当修饰的人工合成的HDAC5氨基端一段多肽(aa 4-19)作为抗原制备而成的抗HDAC5小鼠单克隆抗体。本抗体如果用于常规的Western检测,至少可以检测20次。
本HDAC5抗体识别的是总HDAC5(total HDAC5),可以检测内源性的HDAC5,未发现和其它HDAC蛋白有交叉反应。
染色质由重复的核小体(necliosome)构成,而核小体则包含了由Histone H2A,H2B,H3和H4各两个分子组成的八聚体和与该八聚体结合的DNA。组蛋白(histone)上的一些Lys位点,可以被乙酰化修饰,从而影响染色质的空间结构,最终影响该区域的基因转录调控。通常当组蛋白被乙酰化时,染色质处于相对松散的构象,此时转录因子可以结合到该区域促进相关基因的转录。反之,当组蛋白被去乙酰化时,染色质结构会变得相对致密,该区域相关基因的转录就会被抑制。组蛋白可以被多种乙酰化酶乙酰化,包括PCAF,p300/CBP,GCN5,SRC-1,TAFII250,BRCA-2和Patt1等。组蛋白去乙酰化酶包括HDAC(histone deacetylase)家族和Sirtuin家族(Sirt家族)。HDAC家族包括HDAC1,HDAC2,HDAC3,HDAC4,HDAC5,HDAC6,HDAC7,HDAC8,HDAC9,HDAC10和HDAC11。通常HDAC可以去乙酰化染色质中某些特定区域的组蛋白,导致该区域的染色质结构变得相对紧密,从而抑制该区域相关基因的表达。Class I HDAC包括HDAC1,2,3,8;Class II HDAC包括HDAC4,5,6,7,9,10。Sirtuin家族被称为Class III HDAC。Class IV HDAC只包括HDAC11。HDAC1,2,8主要定位在细胞核;而HDAC3则在细胞核和细胞浆都有分布,并且分布在膜结构上。Class II HDAC在特定条件下可以在细胞核和细胞浆之间穿梭(shuttle in and out)。HDAC在命名时被称为组蛋白去乙酰化酶,但事实上它们可以去乙酰化多种多样的蛋白。例如,HDAC6可以和微管(microtuble)结合,可以去乙酰化tubulin,Hsp90和cortactin等。目前发现大量的蛋白可以被乙酰化修饰,因此HDAC等乙酰化修饰酶被认为在基因转录调控、信号转导、生长发育、分化凋亡、代谢性疾病和肿瘤等多种生理病理过程中发挥重要作用。HDAC的抑制剂目前被认为是很有前景的肿瘤治疗药物。
HDAC5具有组蛋白去乙酰化酶活性,可以和HDAC3一起被免疫共沉淀。HDAC5在肌细胞分化过程中起重要作用。HDAC5可结合肌细胞增强因子(myocyte enhancer factor-2,MEF2)蛋白的氨基末端结构域,抑制MEF2下游基因的表达。在多种癌细胞中过表达HDAC5,会导致非P53依赖的生长抑制和细胞凋亡。
产品组份:
HDAC5抗体————20μl
Western一抗稀释液————20ml
抗体参数:
免疫原:经过适当修饰的人工合成的HDAC5氨基端一段多肽(aa 4-19)
克隆性:单克隆
宿主:小鼠
用途:WB,IP,IC, ELISA
交叉反应性:人,小鼠,大鼠
同种型:IgG1
HDAC5分子量:~124kD
推荐稀释比例:WB(1:1000),IP(1:100),IC(1:200),ELISA(1:5000)
注意事项:
1. 在Western实验后,请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体,包括已经使用过的稀释抗体,4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体,使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象,可以10000g离心1-3分钟,取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况,则可以考虑废弃该抗体。
储存条件:-20℃,有效期一年。
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文献和实验产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组 DNA的污染。 二、实验试剂 Taq酶,M-MLV逆转录酶,dNTPs, DEPC处理水,双蒸水,大肠杆菌总RNA 三、实验 仪器 电泳仪, PCR仪,高速离心机,移液器,电泳仪,电泳槽,紫外分析仪 四、操作步骤 1.cDNA的合成: 逆转录体系的组成: 2.PCR扩增特异性片段 (1)25ul PCR体系
-MULV反转录酶 1 μL 置于 42℃水浴,1h。 ③ 70℃保温5min(使酶失活)。 ④ 于-20℃保存备用。 PCR 扩增目的基因 以反转录产物为模板,克隆引物B1,B2为引物,利用rTaq酶进行扩增目的基因,用于后续连入克隆载体的操作,然后再以表达引物EB1,EB2为引物,利用Pfu DNA聚合酶进行扩增目的基因,用于后续连入表达载体的操作。 94 ℃ 3 min 94 ℃ 45Sec
混合后,70℃水浴5 min(破坏二级结构),再冰浴5min。 ② 在管中依次加入 (反应体系为20 μL): RT 5×buffer 4μL RNasin 1μL dNTP ( 10mM) 2μL 混匀,37℃ 5min。 M-MULV反转录酶 1 μL 置于 42℃水浴,1h。 ③ 70℃保温5min(使酶失活)。 ④ 于-20℃保存备用。 PCR 扩增目的基因
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