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上海希言科学仪器有限公司
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文献和实验A/B/C Random Amplification Protocol
l (USB 70775) 5X Sequenase Buffer Sequenase Dilution Buffer (USB dNTP mix (all 4 dNTPs @ 3 mM) 500ug/ml BSA 0.1 M DTT Primer A (X-1): 40 pmol/µl GTT TCC CAG TCA CGA TCN NNN NNN NN ThermoPol PCR buffer
Thrombin Cleavage of GST-Fusion protein
activity keeps the enzyme in aliquots at -80°C. Thrombin (MW 37kDa) ~4500units/mg. One unit cleaves theoretical 100ug protein in 16hr at 22°C in buffer. Another possibility is to use high purity enzyme from Sigma # T-6884: 3-10 U of thrombin can be used
→离心（3000rpm，10min，4℃），祛缓冲液→加入1ml包含Ⅴ型胶原酶（290U/ml）的Hepes液中，加入防腐剂（甲苯2µl，氯仿2µl）→放于摇床内，常温振荡消化24小时→离心获取上清液。避光静置1h→用荧光分光光度仪在370/440波长下测定荧光强度，其值用空白胶原酶校正。AGE含量以每mg羟脯氨酸（HYP）所含荧光强度为一个任意单位，用AU（arbitrary unit）表示，即AU/mgHYP。
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