测定大鼠心肌AGEs含量标准操作规程(SOP)

名称：测定大鼠心肌AGEs含量标准操作规程(SOP)

关键词：大鼠心肌；AGEs含量

目的：观察糖基化终末产物的生成量，用于判定药物对糖尿病心肌病大鼠的疗效。

主体内容：

制备心肌匀浆组织后→离心（3000rpm，10min，4℃）→弃上清，沉淀物用去离子水洗3次，加入5ml氯仿-甲醇（2：1）→放入摇床内，4℃振荡过夜后，加入2ml甲醇，0.5ml去离子水→离心（3000rpm，10min，4℃），分别用甲醇，去离子水水化，冲洗→Hepes缓冲液冲洗2次后。

将其放入5ml的Hepes缓冲液，4℃过夜→离心（3000rpm，10min，4℃），祛缓冲液→加入1ml包含Ⅴ型胶原酶（290U/ml）的Hepes液中，加入防腐剂（甲苯2µl，氯仿2µl）→放于摇床内，常温振荡消化24小时→离心获取上清液。

避光静置1h→用荧光分光光度仪在370/440波长下测定荧光强度，其值用空白胶原酶校正。AGE含量以每mg羟脯氨酸（HYP）所含荧光强度为一个任意单位，用AU（arbitrary unit）表示，即AU/mgHYP。