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100万
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上海觅拓
- 物种来源:
小鼠Lewis肺癌细胞
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复苏
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贴壁生长
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T25
培养条件: 饱和湿度二氧化碳培养箱:温度37℃,5%的二氧化碳
细胞传代: 1:2~1:3传代;2~3天换液1次
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文献和实验双荧光素酶 启动子 转录因子 实验怎么设计?内参和分组一步别错
上,转录因子过表达用 GV712,启动子构建到 GV534(MCS-LUC2),海肾对照单独录 CV045。若只做野生型验证,确认有调控后再按每缺失 500 bp 做启动子截短,逐步缩到结合区。 一个容易被忽略的判断 双荧光素酶的灵魂是“归一化”。 内参不是装饰,它用于校正细胞数、转染效率和裂解差异。没有内参,尤其跨孔比较时,信号高低很容易被技术波动放大。 内参为什么不能省 很多人嫌内参加一组麻烦,直接只读萤火虫,结果不同孔转染效率差一倍,比值全乱。海肾内参的价值正是把"转进去多少"和"细胞活不活
细胞 ATP 检测和活体肿瘤示踪,共用一套双荧光素酶体系吗?
Section.01 什么是双荧光素酶实验? 双荧光素酶实验 (Dual-Luciferase Reporter Assay) 是一种广泛应用于分子生物学的经典实验技术,主要用于定量检测基因表达水平以及验证生物大分子之间的相互作用 (如 miRNA 与靶基因、转录因子与启动子)。 核心原理 该实验利用荧光素酶基因转染到细胞中,通过检测其产生的荧光素酶活性 (“生物发光”) 来量化目标基因的表达水平。实验中会同时使用两种荧光素酶:萤火虫荧光素酶
2)。 图2 使用BLOCK-iT™ Complete Dicer RNAi Kit得到>80%的靶定基因阻断 经Dicer酶切的,来源于β-半乳糖苷酶或者荧光素酶的dsRNA产生siRNA(d-siRNA)库,用来确定d-siRNA特异阻断基因活性的效果。GripTite™ 293 MSR 细胞共转染pcDNA™1.2/V5-GW/lacZ阳性对照质粒和pcDNA™5/FRT/luc,分别独自表达β-gal或者荧光素酶报告子,或者50ng luc 或者lacZ d-siRNA。对于每一种报告子
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