β-半乳糖苷酶

β-半乳糖苷酶试验

　　β-半乳糖苷酶试验是检验主管技师考试辅导的部分内容，以下是医学教育网对这块内容的整理，希望对考生有所帮助： 　　β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验） 　　（1）试剂：0.75M ONPG溶液。 　　（2）方法：从克氏双糖铁培养基上取菌，于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液，加入一滴甲苯并充分振摇，使酶释放。将试管置37℃水浴5min，加入0.25ml ONPG试剂，水浴20min～3h观察结果。 　　（3）结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在20～30min内显色

β-半乳糖苷酶 β-galactosidase

　　一种能把乳糖水解成葡萄糖和半乳糖的酶。 EC3． 2． 1． 23。一般是指能将β -半乳糖苷水解为半乳糖和糖苷的酶。很早以来，就被认为是大肠杆菌诱导酶的典型。分子量 54万，为四聚体。其结构基因为 LacZ，与 LacY（半乳糖苷透性酶）和 LacA（半乳糖苷转乙酰酶）同组成乳糖操纵子，并在特异的乳糖操纵系统中的阻遏物、操纵基因、启动子等的协同下，支配调节β -半乳糖苷酶的合成。当培养基中无诱导物质时，每一细胞中虽然没有几个分子的β -半乳糖苷酶；但一旦被诱导，则每一

表达β-半乳糖苷酶噬菌体的噬菌斑分析

材料： LB或NZCYM顶层琼脂或琼脂糖，含有X-gal。对于3ml顶层琼脂，加40µl 2%X-gal。X-gal要在临用前才加入已冷却的顶层琼脂（47℃）中。 大肠杆菌铺平板细菌。只有不是β-半乳糖苷酶的过量表达株，可采用任何支持特异性λ噬菌体裂解生长的大肠杆菌。细菌染色体上单拷贝lacZ基因的存在不影响噬菌斑的检测。 方法： 1.  将λ噬菌体原种于SM+明胶液稀释。 2.  用10µl适当稀释的λ噬菌体感染0.1ml铺平板细菌。感染培养