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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 检测范围:
临床体外诊断
- 检测方法:
酶联免疫法
- 应用:
用于人血清中抗精子表面抗原自身抗体体外定性检测
- 适应物种:
人
- 标记物:
过氧化物酶
- 样本:
血清
- 库存:
大量
- 供应商:
深圳市科润达生物工程有限公司
- 规格:
96T/盒
通用名称:抗精子抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
英文名称:Spermatozoa-Ab ELISA
【产品规格】
96T
【预期用途】
用于人血清中抗精子表面抗原自身抗体体外定性检测
【前言简介】
在西方国家,不孕夫妇的比例占总人群的10~15%(Haas et al,1980)。目前人们还不能精确的知道由免疫学因素导致不孕的发病率是多少。由于有很多不同的检测方法,人们对抗精子抗体在不孕中的作用存在着很大争议。在检测抗精子抗体的传统检测方法中,精子凝集检测和精子固定检测已被广泛应用。这些方法及其它凝集检测都很耗费时间,并且结果与其操作不协调。与传统的检测方法相比,用ELISA检测抗精子抗体具有很多优点。IBL公司的抗精子抗体ELISA试剂盒结合这些优点,并同时还具有高灵敏度和高特异性的特点。此试剂盒操作简单,并且可以检测很多种血清。
【检测原理】
此ASAb抗精子抗体检测试剂(人ELISA试剂盒)利用的是非竞争性的原理。包被在微孔中的精子表面抗原是从池子中提取到的,它采用的方法是Alexander在1984年所提及到的那种方法。将疑似免疫学不孕病人的血清(已稀释好)加入到包被孔中温育,之后洗板,再加入过氧酶标记的抗人免疫球蛋白(IgA,IgG和IgM)并温育。温育后洗板,再加入TMB底物液,并酶标仪检测所显示的颜色强度。微孔中所显示的颜色强度与结合的免疫球蛋白浓度成正比。实验结果可从标准曲线上读取,结果单位为units/ml。
【试剂盒组成成分】
微孔板 12×8孔
微孔中包被了精子表面抗原。
标准品 3支
冻干粉,将每支冻干粉溶解于1ml的洗涤液中。重新配制好的标准品(标准品S5)100μl内含500mU抗精子抗体。
酶联物 100μl
601倍浓缩,内含HRP标记的抗人IgG、IgA、IgM,使用前用稀释液按1:601的比例进行稀释。
TMB底物液 12ml
即用,内含TMB及稳定剂。
TMB终止液 12ml
即用,内含1M,注意:避免皮肤接触。
洗涤液 50ml
20倍浓缩,用双蒸水按1:20的比例稀释,配置好的洗涤液在2-8℃的环境下可稳定存放4周。
稀释液 3×20ml
配置好的稀释液在2~8℃的环境下可稳定存放2天,如果冻存于-20℃的环境下则可存放更长时间。
质控血清 3×1ml
质控血清应在每次实验时临时配置,并且仅能使用一次。质控血清的可接受范围请见质控单。
封板纸 5片
实验所需器材(未提供)
- 校准的精密移液器及取样吸头:0~20μl、10~100μl、100~1000μl
- 多道移液器,50~200μl
- 洗板机及洗涤瓶
- 37℃温育器
- 带450nm滤光片的酶标仪
ASAb抗精子抗体检测试剂(人ELISA试剂盒)应当2~8℃的环境下运输。微孔板条一但被拆开,应当将其重新密封好。拆开了板条储存于2~8℃的环境下时,其免疫活性可稳定6周。
【样本要求】
按照一般原则进行静脉采血。不要使用明显溶血、黄疸血和脂血样品。采集的样品存放于2~8℃的环境下时,必须在24小时内将其检测掉。如果想将血清存放更长时间,可以将血清冻存于-20℃的环境下,避免反复冻融。
用稀释液将病人样品按1:51的比例进行稀释(例如:10μl样品+500μl稀释液),混合均匀。稀释好的样品于2~8℃下可保存24小时。
【检验方法】
ASAb抗精子抗体检测试剂(人ELISA试剂盒)实验开始前将所需数目的板条和所有试剂都平衡到室温。试剂盒可分3次进行检测,下面所述体积可用来检测4条包被板条(32个检测孔)。如果实验中需使用更多板条,则体积应当相应的进行改变。
洗涤液
将30ml浓缩的洗涤液中加入到600ml双蒸水中。配置好的洗涤液在2-8℃的环境下可稳定存放4周。冷藏时溶液会出现磷酸盐沉淀物,室温下又会溶解。
稀释液
每支冻干的稀释液中加入到20ml即用型的洗涤液中。配置好的稀释液在2-8℃的环境下可稳定存放2天,如果冻存于-20℃的环境下则可存放更长时间。
标准品、质控血清
- S5(500mU/100μl),将每支标准品用1ml即用型的洗涤液进行稀释。重新配制好的标准品(标准品S5)100μl内含500mU抗精子抗体。
- 其它浓度的样品可用稀释液进行连续稀释获得,具体如下:
| S5 500mU/100μl S4 250mU/100μl= 500μl S5 + 500μl稀释液 S3 125mU/100μl= 500μl S4 + 500μl稀释液 S2 62.5mU/100μl= 500μl S3 + 500μl稀释液 S1 31.3mU/100μl= 500μl S2 + 500μl稀释液 S0 0 mU/100μl= 500μl稀释液(零标准品) |
- 质控血清,在每支冻干的质控血清中加入1ml即用型的洗涤液。
酶联物
在15μl浓缩的酶联物中加入9ml稀释液,混合均匀。配置好的酶联物可在室温下稳定存放20min。
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