脂肪组织蛋白提取试剂盒

贝博® BBproExtra® 脂肪组织蛋白提取试剂盒适用于从脂肪组织和各种脂肪含量高的实体组织和细胞，如脂肪细胞、脂肪肝细胞、脑、脂肪、脂肪肝脏、结缔组织、胸腺组织等动物组织中提取可溶性总蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。 该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

1. 提取液制备：
每500 μl蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取100-200 mg组织样本剪碎，加入500 μl蛋白提取液A，用组织匀浆机/匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃条件下振荡15-30分钟。
4. 将含有脂肪的上清吸入蛋白离心管中，套上液体收集管，在4℃，10000×g条件下离心5分钟。
5. 将液体收集管中的液体吸入另一干净离心管，在4℃，14000×g条件下离心10分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到蛋白样品。
7. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

 

1.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
有些脂肪样品的蛋白含量很低，需要尽可能加大脂肪样品的上样量，或者进行蛋白浓缩。

2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。