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- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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2-8℃
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大量
- 供应商：
BestBio贝博
- 规格：
50T/100T
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。DiOC6(3)是一种可以通透细胞膜的选择性染色活细胞线粒体的荧光染料，可以用作检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)的荧光探针。 DiOC6(3)是亲脂性荧光染料，其在水溶液中时荧光较弱，与脂质结合后荧光大幅度增强。在正常细胞中能够依赖线粒体跨膜电位进入线粒体内膜。在细胞凋亡发生时，线粒体膜完整性破坏，线粒体膜通透性转运孔开放，引起线粒体跨膜电位(ΔΨm) 的崩溃，DiOC6(3)重新释放出线粒体膜。通过荧光信号的强弱来检测线粒体膜电位的变化。 本试剂盒可用于培养的细胞或从组织中提取出的线粒体的膜电位检测。 贝博® BBcellProbe® DiOC6(3)可以快速通过细胞膜，仅需几分钟就可以被具有活性的线粒体所俘获，并且对细胞没有任何毒性。DiOC6(3)的最大激发波长为482nm，最大发射波长为500nm。在荧光显微镜下观察，呈现黄绿色荧光。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
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文献和实验悬浮细胞
1. 试剂配制：
根据样本数量，用37℃培养箱预热染料稀释液试剂B将DiOC6(3)荧光染料10倍稀释。再用HBSS或相应的无血清培养基或其他缓冲液将探针DiOC6(3)进行25000倍稀释，配制成染色工作液。
2. 收集样本细胞以及阴性、阳性对照细胞。
3. 用PBS洗涤细胞两次。离心收集细胞。
4. 用500 μl DiOC6(3)染色工作液将细胞重悬，细胞密度约5-10X105个/ml。37℃，5% CO2的培养箱中孵育15-30分钟。
5. 常温离心收集细胞。 用PBS洗涤细胞2次。
6. 用500 μl预热的HBSS或PBS缓冲液将细胞重悬。
7. 用流式细胞仪或荧光酶标仪/分光光度计检测分析结果，或者用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察结果。
贴壁细胞
对于贴壁细胞，可以先收集细胞，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。
纯化线粒体
1． 把配制好的DIOC6(3) 染色工作液再用DIOC6(3)孵育缓冲液(1×)稀释5 倍。
2． 0.9mL 5倍稀释的DIOC6(3) 染色工作液中加入0.1mL 总蛋白量为10～100 μg的纯化的线粒体。
3． 结果检测。
组织样本
组织样本可以用玻璃匀浆器匀浆成单细胞悬液后按照细胞样本的方法检测。也可以用其他细胞悬液制备的试剂盒处理组织后检测。
结果分析 ：
检测时可以把激发光设置为488nm，发射光设置为500nm。
线粒体膜电位降低，荧光强度减弱。
用流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位的情况。
也可以用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察；用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测。
