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- BB-41062
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2-8℃
- 保质期：
一年
- 库存：
大量
- 供应商：
贝博生物
- 规格：
50T/100 T
| 规格： | 50T | 产品价格： | ￥1200.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100 T | 产品价格： | ￥2200.0 |
贝博TM BBcellProbeTM Caspase-3 活性检测试剂盒(Caspase 3 Activity Assay Kit)是采用荧光法检测细胞或组织裂解液中Caspase 3酶活性或纯化的Caspase 3酶活性的试剂盒。 本Caspase 3 活性检测试剂盒是基于casepase 3可以催化Caspase-3荧光底物产生绿色荧光产物AFC，AFC在400nm激发，发射波长505nm。生成的AFC量与caspase 3的活性成正比，从而可以通过测定荧光强度来检测caspase 3的活性。 Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 3也称CPP32、Yama或apopain，有时被写作caspase-3或caspase3，属于caspase家族的CED-3亚家族(CED-3 subfamily)，是细胞凋亡过程中的一个关键酶。Caspase 3是哺乳动物细胞中研究最多的一个caspase。Caspase-3在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；但在细胞发生凋亡阶段，Caspase-3被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基和两个小亚基组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。Caspase 3可以剪切procaspase 3、6、7和9，并可以直接特异性剪切许多caspase底物，包括PARP，ICAD，gelsolin和fodrin等。这些由caspase 3介导的蛋白剪切是细胞凋亡分子机制的重要组成部分。另外，caspase 3在细胞核凋亡过程中也起到了关键作用，包括染色质固缩，DNA片段化等。同时caspase 3对细胞起泡也起到关键作用。 本试剂盒可用于培养细胞或新鲜组织样本的caspase-3检测。 贝博还可以提供R110，AMC等荧光标记的Caspase-3 活性检测试剂盒。没有荧光检测条件，可以选择贝博的比色法Caspase-3活性检测试剂盒（相关产品BB-4106）。
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文献和实验一、 裂解缓冲液和检测缓冲液配制
根据待测样品数准备裂解缓冲液和检测缓冲液，每1ml缓冲液中加入10ul DTT。充分混匀置冰上备用。
二、 样品处理
A． 细胞样品
1. 收集5×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 在细胞中加入50μl冷的裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4. 置冰上持续振荡15-30分钟。
5. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上保存备用。
B． 组织样品
1. 取适量组织样本剪碎，按照每50mg/100μl冷的裂解缓冲液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上振荡15-30分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
2. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
3. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
三、 对上述处理过的上清进行蛋白定量。
四、 Caspase 3活性检测
1、 取50ul裂解上清（含100-200ug蛋白），加入50ul检测缓冲液。
2、 再加入5ul caspase-3荧光底物，充分混匀，在37℃下避光反应1-2小时。
3、 荧光酶标仪检测。Ex=400nm，Em=505nm。
， 5~10min/次？→ECL显影或NBT/BCIP显色。结果：2、荧光分光光度计分析原理：活化的Caspase-3能够特异切割D1E2V3D4-X底物，水解D4-X肽键。根据这一特点，设计出荧光物质偶联的短肽Ac-DEVD-AMC.在共价偶联时，AMC不能被激发荧光，短肽被水解后释放出AMC，自由的AMC才能被激发发射荧光。根据释放的AMC荧光强度的大小，可以测定caspase-3的活性，从而反映Caspase-3被活化的程度。 方法：收获细胞正常或凋亡细胞，PBS洗涤，制备细胞裂解液，加Ac
。 2. western blot可以半定量 3. caspase的活性有试剂盒可以检测 yqsqzr 谢谢了，是不是一般caspase的检测都是用western blot? western步骤多，比较繁琐，是否有可能检测不到结果？ zgxsea caspase蛋白酶的活性检测方法，个人做过和了解的有这样几种： 1. 荧光光度计/分光光度计法，比较简单，只要有荧光或普通酶标仪即可，操作过程类似与ELISA
， 5~10min/次?→ECL显影或NBT/BCIP显色。结果如图9-2： 2 荧光分光光度计分析 原理：活化的Caspase-3能够特异切割D1E2V3D4-X底物，水解D4-X肽键。根据这一特点，设计出荧光物质偶联的短肽Ac-DEVD-AMC。在共价偶联时，AMC不能被激发荧光，短肽被水解后释放出AMC，自由的AMC才能被激发发射荧光。根据释放的AMC荧光强度的大小，可以测定caspase-3的活性，从而反映Caspase-3被活化的程度。方法：收获细胞正常
