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- 2025年07月15日
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BestBio贝博
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50T/100T
贝博® BBcellProbe® 线粒体膜电位检测试剂盒（TMRM法）是利用TMRM探针检测线粒体膜电位的试剂盒，可以快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化，可以用于早期的细胞凋亡检测。 线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。TMRM是一种可以通透细胞膜的选择性染色活细胞线粒体的荧光染料，广泛用作检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)的荧光探针。与 JC-1一样，TMRM是阳离子荧光染料，在正常细胞中能够依赖线粒体跨膜电位进入线粒体基质。在细胞凋亡发生时，线粒体膜完整性破坏，线粒体膜通透性转运孔开放，引起线粒体跨膜电位(ΔΨm) 的崩溃，TMRM重新释放出线粒体。通过荧光信号的强弱来检测线粒体膜电位的变化，可用于培养的细胞或从组织中提取出的线粒体的膜电位检测。 四甲基罗丹明甲基酯（TMRM）可以选择性的定位于线粒体中，在线粒体中的积累被证明是由它们的膜电位驱动的。此外，由于它们的疏水特性降低，这些探针对细胞表现出与罗丹明6G相比低10-20倍的电位非依赖性结合。四甲基罗丹明乙酯为动态和最佳原位定量测量荧光染料之一，比罗丹明123更好 ，因为其被活细胞快速和可逆地吸收。 TMRM比罗丹明123更快地穿过质膜，并且它们的强荧光允许使用低探针浓度，从而避免聚集。由于它们的荧光对环境相对不敏感，因此TMRM的空间分辨荧光呈现其跨膜分布的无偏分布，TMRM已成功用于高分辨率对于影响活细胞中线粒体膜电位的药物的高通量筛选测定。 贝博® BBcellProbe® TMRM可以快速通过细胞膜，仅需几分钟就可以被具有活性的线粒体所俘获，并且对细胞没有毒性。其荧光的增强或减弱说明线粒体膜电位的变化，线粒体膜电位的高低变化决定了TMRM的分布浓度。电位高，TMRM在线粒体的浓度高，显示为强力红色或桔红色；反之，TMRM弥散在胞浆内，荧光减弱表明线粒体膜电位降低。 TMRM将线粒体染色，带有橙色荧光，它的光谱特征与TRITC相似，TMRM的最大激发波长为549nm，最大发射波长为574nm。
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文献和实验染色工作液的配制：
根据样本数量，用37℃培养箱预热染料稀释液试剂B将TMRM荧光染料10倍稀释。再用HBSS或相应的无血清培养基或其他缓冲液将探针TMRM进行5000倍稀释，配制成染色工作液。
悬浮细胞
1. 收集样本细胞。
2. 用PBS洗涤细胞两次。离心收集细胞。
3. 用500 μl TMRM染色工作液将细胞重悬，细胞密度约5-10X105个/ml。37℃，5% CO2的培养箱中孵育30分钟。
4. 室温离心收集细胞。 用PBS洗涤细胞2次。
5. 用500 μl预热的PBS/HBSS缓冲液将细胞重悬。
6. 用流式细胞仪或荧光酶标仪/分光光度计检测分析结果，或者用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察结果。
贴壁细胞
对于贴壁细胞，可以先收集细胞，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。也可以直接原位染色后检测。
纯化线粒体
1． 把配制好的TMRE 染色工作液再用TMRE稀释液稀释5 倍。
2． 0.9 mL 5倍稀释的TMRE染色工作液中加入0.1 mL 总蛋白量为10～100 ug的纯化的线粒体。
3． 结果检测。
组织样本
组织样本可以用玻璃匀浆器匀浆成单细胞悬液后按照细胞样本的方法检测。也可以用其他细胞悬液制备的试剂盒处理组织后检测。
结果分析 ：
检测时可以把激发光设置为549 nm，发射光设置为574 nm。
线粒体膜电位降低，荧光强度减弱。
用流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位的情况。
也可以用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察；用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测。
Cell：清华俞立团队首次发现迁移体介导的线粒体胞吐，一种新型线粒体质控过程
的绝大多数线粒体都是 MitoSOX 阳性的，并且通过线粒体探针 TMRM 染色证实迁移体内的线粒体已经失去了线粒体膜电位。图片来源：Cell2、肌动蛋白选择性结合受损的线粒体那么受损的线粒体如何被感知并转运到迁移体中呢？TEM 分析表明，受损的线粒体可能被选择性地转运至细胞周围。为了验证该假设，该研究首先分析了 KIF5B 和动力蛋白在分离的线粒体上的募集。研究发现，用 10 mM CCCP 处理细胞会显著降低肌动蛋白的线粒体募集并增加 KIF5B 的募集。相比之下，用 2 mM CCCP 处理
rhodamine methyl ester（TMRM）等可结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。 一、方法将正常培养的细胞和诱导凋亡的细胞加入使用终浓度为Rhodamine 123（1mM）或终浓度为DiOC6（25nM），JC-1（1mM），TMRM（100nM），37°C平衡30min，流式细胞计检测细胞的荧光强度。 二、注意事项1、始终保持平衡染液中pH值的一致性，因为pH值的变化将影响膜电位。 2、与染料达到平衡的细胞悬液中如果含有蛋白，他们将与部分染料结合，降低
线粒体膜势能的检测 线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用,多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡,而线粒体跨膜电位DYmt的下降,被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件,它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体DYmt崩溃,则细胞凋亡不可逆转. 线粒体跨膜电位的存在,使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine 123、3,3-Dihexyloxacarbocyanine iodide[DiOC6(3)]、Tetrechloro
