H2Apan多克隆抗体

免疫共沉淀(Co-IP)详细步骤教程

，缓冲液的量依据上样多少的需要而定（60 μl足够上三道） 15. 将上样样品煮5min，以游离抗原，抗体，珠子，离心，将上清电泳，收集剩余琼脂糖珠，上清也可以暂时冻-20℃，留待以后电泳，电泳前应再次煮5min变性。 RIPA Buffer配制： 基础成分： Tris-HCl（缓冲液成分，防止蛋白变性） NaCl（盐份，防止非特异蛋白聚集） NP-40（非离子去污剂，提取蛋白；用H2O配制成10%储存液） 去氧胆酸钠（离子去污剂，提取蛋白；用H2O配制成10%储存液；避光保存） 注意：准备激酶

多克隆抗体制备流程

抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。一般而言，抗体按靶位点不同主要分为单克隆抗体和多克隆抗体 ，由多个B淋巴细胞克隆产生的，受到多种抗原决定簇刺激并可以与多种抗原表位结合的抗体就是多克隆抗体 ， 本篇主要讲述兔源性多克隆抗体制备的相关流程。抗原有两个基本特性，即抗原性和免疫原性。有抗原性的物质不一定有免疫原性，所以由此引出半抗原和完全全抗原，半抗原必须经过经过一定的改造（偶联蛋白载体

石蜡切片免疫组织化学染色

发生，最好在特异性抗体处理切片之前，选择与二抗种属相同的非免疫血清封闭电荷，阻止一抗与之结合，抑制非特异性背景着色。常用方法是用2%～10%羊血清或2%～5%牛血清白蛋白在室温下作用10~30分钟。但应注意此种结合不牢固，所以最好不要冲洗，倾去余液直接加一抗。SABC或SP免疫组织化学试剂盒中常配有非免疫血清。 7．第一抗体孵育 滴加特异性一抗于切片上，4℃孵育24～48小时，或室温孵育过夜，也可在37~C孵育1～2小时。之后，用PBS冲洗3次，每次5分钟。一抗分为多克隆抗体和单克