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文献和实验偶联受体 (GPCR)，主要表达于免疫源细胞。它涉及炎症、神经退行性疾病、肥胖和疼痛等代谢途径的调节，因此也是药物开发的一个重要靶标。在本篇文章中，作者使用亲和标签开发的新纯化方案能够有效分离宿主细胞中低表达的重组 GPCR。该方法适用于制备毫克量的稳定同位素标记受体，用于高分辨率核磁共振研究。 一、实验设计思路 1、CB2 表达载体构建：为了找到最合适的标签位置，作者对 Linker 和 Twin-Strep-tag 标签位置进行了不同的设计。 2、E.coli 系统表达 CB2 蛋白及膜蛋白制备，测定
机溶剂抽提） c、去除样品中核酸（加入核酸酶消化或者使核酸沉淀） d、抑制样品中蛋白水解酶（加入蛋白酶抑制剂、低温下快速第一步分离或在蛋白酶缺陷宿主中表达重组蛋白） 表 2 样品中有害杂质及去除办法 杂质 害处 预防
对宿主细胞具有毒性，从而选择抗毒性的表达系统；怎样选择表达系统，是大肠杆菌表达系统，酵母表达系统还是CHO细胞表达系统，不同的表达系统和培养方法显著影响下游的处理过程，目标蛋白表达的定位（胞内、细胞内膜、周质空间和胞外），蛋白表达的量都依赖于所选择的表达系统；蛋白的化学性质，是否容易被蛋白酶降解，是否会和一些金属离子，化学成分发生反应；蛋白的物理性质，是否对温度敏感等。从蛋白基因的获取，蛋白基因的克隆，蛋白的表达，做好一个整体的规划，将对纯化工作的方便快捷高效带来关键的影响。基因工程构建的纯化标记
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