- ￥5280
- 赫澎生物
- 上海
- HPBIO-JM9937
- 2025年11月07日
企业认证
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
干燥密封保存
- 供应商：
赫澎（上海）生物
- 规格：
20次
产品内容
HEPENGBIO缓冲液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO标记液（Reagent B） 微升（用户自备）
HEPENGBIO反应液（Reagent C） 微升
HEPENGBIO酶促液（Reagent D） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里；
用户自备
[γ32P]ATP 同位素：用于同位素标记
1.5毫升离心管：用于样品反应操作和保存的容器
干式恒温仪：用于标记孵育
液体闪烁计数器（liquid scintillation counter）：用于同位素活性测定
实验步骤
- 准备好纯化的GST融合蛋白
- 移取xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent A）到1.5毫升离心管
- 加入2.5微升用户自备的GST融合蛋白（总量为10微克）
- 加入xx微升HEPENGBIO标记液（Reagent B）（注意：同位素总量为10毫居里/毫升；5000居里/毫摩尔）
- 加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent C）
- 加入xx微升HEPENGBIO酶促液（Reagent D）
- 枪头上下抽吸混匀
- 放进30℃干式恒温仪孵育30分钟
- 放进-70℃保存或置于冰槽里备用
- 或使用5至10微升（107CPM）标记蛋白继续后续远西方杂交（FAR WESTERN BLOT） 印迹实验和印迹覆膜结合（BLOT OVERLAY BINDING）实验等
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- 内容
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文献和实验的，开始用异丙醇，胶全滑了，再不封则不齐，上面有锯齿状），凝胶45分钟以上，倒去封胶的水，用滤纸吸干，再配积成胶，插上1mm的配套的梳子以上两步最好在实验的前一天准备好3、 磷酸化反应这天最好早点来，吃好早餐（因为中午要吃得比较晚啦），来了把蛋白（记得要把阳性和阴性蛋白拿出来哟）和磷酸化buffe拿出来解冻。开好同位素房的水浴锅了，然后就好象做酶切一样简单的加样了，只不过要小心了，有同位素哟！（10x磷酸化buffer 3ul; 2pM的ATP 1ul; 蛋白激酶1ul; γ-32P-ATP 0.5ul
步骤的。pGEX-6P有三种载体，以方便你从不同的酶切位点插入都不会造成移码突变。另外值得一提的是pGEX-2TK是专门为了体外标记融合产物以检测表达情况而设计的。它含有来自心肌的cAMP依赖性蛋白激酶催化亚单位的识别位点，这个位点位于GST和多克隆位点之间。表达的蛋白可以直接用蛋白激酶和[g-32P]ATP进行标记，产物可以用放射自显影技术稳定地检测。它的GST可以用凝血酶切除。总的说来，pGEX所有载体都提供了三种不同的翻译读码框选择；都是利用乳糖操纵子调控模式，启动子都是Ptac。Ptac是由trp启动
粘膜端，在反应中只加入[α-32P]dNTP或[α-32P]dGTP，使可选择性标记两末端之一。 3．用T4多核苷酸激酶标记DNa 5’末端 寡核苷酸探针或短的RNA和DNA探针可选用此法标记，寡核苷酸探针一般多用这种标记。T4多核苷酸激酶（polynucleotide kinase, PNK）是由T4噬菌体感染的大肠杆菌中提取的，此酶能催化ATP的γ-磷酸转移至DNA或RNA的5’－OH末端。在过量ADP存在时，也可促进磷酸交换反应，使PNK将DNA末端5’磷酸转移到ADP上生
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