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子科生物
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美国GENMED主要运用世界上最尖端的基因综合技术平台(数字化染色体基因型完全分析技术、表观基因组完全分析技术、染色体单体分离分析技术、基因靶标技术、全基因表达完全分析技术、RNA拼接图谱综合分析技术、SiRNA完整表达文库构建技术、细胞抗原谱学技术、胶体金层析法金标技术、蛋白激酶组学完全分析技术、蛋白表位标记技术、Seldi蛋白质谱分析技术、高容量细胞荧光筛选技术、高通量远红外细胞免疫筛选技术),从事疾病指纹诊断系统、农作物种子改造和分子操作、生物反应器、中草药和海洋生物抗肿瘤活性物质筛选、基因检测中心、技术平台服务和培训等独步天下的杰美产品和服务体系的开发,以期成为基因医学产业化的领军企业。
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文献和实验Protease 是一种由人鼻病毒 14 型的 3C 蛋白酶和 GST 组成的融合蛋白。它可以特异性的将 pGEX-6P 系列等载体表达出的带有酶底物识别氨基酸序列融合蛋白的 GST 标签进行分离。由于其自身带有 GST 标签,Prescission Protease 能在单一步骤实现 GST 标签的柱上酶切和蛋白质纯化。此蛋白酶在低温条件下具有最佳活性,因此低温孵育不仅可以保证 GST 标签的高效去除,也能维持目标蛋白的活性。 Thrombin 和 Factor Xa 常温下具有较高的酶活,当选
。这13个载体中有9个的多克隆位点是扩展过的,有6个限制性酶切位点。扩展后的多克隆位点方便我们从λ噬菌体载体构建的文库中将所需的基因克隆出来并定向插入到表达载体中。所有载体上都带有可以将GST切割下来的蛋白酶识别位点,不同载体携带的蛋白酶不同,可以分成T系列、X系列和P系列,分别代表采用凝血酶Thrombin、Xa因子蛋白酶以及GE医疗产的PreScission™蛋白酶作为蛋白酶切割位点。前面两个都是非常经典的融合表达载体的蛋白酶切割位点,但是由于这两种蛋白酶切割需时较长而且要求在室温条件下切割GST
了两个与分离纯化有关的编码序列,其一是谷胱甘肽转移酶基因,其二是凝血蛋白酶(Thrombin)切割位点的编码序列。当外源基因插入到多克隆位点后,可表达出由三部分序列组成的融合蛋白。 GST 是来源于血吸虫的小分子酶( 26kDa),在 E.coli 易表达,在融合蛋白状态下保持酶学活性,对谷胱甘肽有很强的结合能力。 将谷胱甘肽固定在琼脂糖树脂上形成亲和层析柱,当表达融合蛋白的全细胞提取物通过层析柱时,融合蛋白将吸附在树脂内,其它细胞蛋白就被洗脱出来。然后再用含游离的还原型谷胱甘肽的缓冲
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