真菌/酵母细胞样品细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒

细胞色素C氧化酶（Cytochrome c oxidase）存在于真核生物的细胞线粒体上（包括真菌和酵母细胞），主要通过氧化磷酸化为细胞提供能量。基于底物还原型细胞色素C（reduced cytochrome c），受到细胞色素C氧化酶的催化，转化为氧化型细胞色素C（oxidized cytochrome c），在分光光度仪下，出现吸光值的变化（550nm 波长），由此定量测定细胞色素C氧化酶的活性。细胞色素C氧化酶反应系统为：

Cytochrome c oxidase
4 cytochrome c^2＋ + 8H⁺ + O₂ → 4 cytochrome c³⁺ + 2H₂O + 4H⁺
还原型 氧化型
（高吸收峰） （低吸收峰）

产品内容

HEPNGBIO裂解液（Reagent A） 10毫升
HEPNGBIO强化液（Reagent B） 2毫升
HEPNGBIO活性液（Reagent C） 250微升
HEPNGBIO缓冲液（Reagent D） 20毫升
HEPNGBIO反应液（Reagent E） 2毫升
HEPNGBIO稳定液A（Reagent F1） 1管
HEPNGBIO稳定液B（Reagent F2） 250微升
产品说明书 1份

保存方式

HEPNGBIO强化液（Reagent B）和HEPNGBIO缓冲液（Reagent D）保存在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；HEPNGBIO反应液（Reagent E）避免光照；有效保证6月

用户自备

15毫升锥形离心管：用于真菌/酵母细胞收集的容器
1.5毫升离心管：用于真菌/酵母细胞裂解操作或反应液配制的容器
台式离心机：用于沉淀真菌/酵母细胞
微型台式离心机：用于真菌/酵母细胞裂解悬液澄清
比色皿：用于比色检测的容器
分光光度仪：用于比色分析

实验步骤

• 样品准备

1. 1. 准备好10毫升待测的新鲜真菌/酵母细胞（OD600＝0.4至0.8，即1至2 X 10⁷细胞/毫升）
   2. 移入到预冷的15毫升锥形离心管
   3. 置于冰槽里5分钟
   4. 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为1000g
   5. 小心抽去上清液
   6. 加入250微升HEPNGBIO裂解液（Reagent A），充分混匀
   7. 转移到预冷的1.5毫升离心管
   8. 加入100微升HEPNGBIO强化液（Reagent B）（注意：参见注意事项3）
   9. 加入12.5微升HEPNGBIO活性液（Reagent C）
   10. 强力涡旋震荡15秒
   11. 置于冰槽里1分钟
   12. 重复实验步骤10至11五次
   13. 加入250微升HEPNGBIO裂解液（Reagent A），充分混匀
   14. 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
   15. 小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
   16. 移取5微升进行蛋白定量测定（注意：建议使用HEPNGBIO Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－HEPNGBIO30030.1）
   17. 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

• 测读准备

1. 准备好上述制备好的样品，置于冰槽里融化
2. 设定好分光光度仪：温度28℃，波长550nm，间隔10秒，测读7次（共