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革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂盒

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  • ￥3960
  • 赫澎生物
  • 上海
  • HPBIO-JM7414
  • 2025年11月28日
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    赫澎（上海）生物科技有限公司
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      干燥密封保存

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      现货

    • 供应商：

      赫澎（上海）生物

    • 规格：

      20次

    外膜囊泡（outer membrane vesicle；OMV）为含有周质内容物（包括外膜蛋白、DNA、RNA、脂多糖、脂质、周质蛋白、黏附素、免疫调节化合物等）的球形电子致密芽状体（spherical bud），细胞外间隔体，双层磷脂，20至200纳米大小，来自于革兰氏阴性细菌周边突起物的释放形成或胞外分泌产物，使之与环境或宿主细胞进行反应，并调解各种功能，包括促进病理形成，调节细菌互动，转运各种信号分子（例如DNA、RNA、蛋白质、内毒素、毒力因子等），保护细菌生存、结合和侵入，引起毒性，产生抗生素抗性等。外膜囊泡的产量取决于细菌生长周期、营养条件、温度、氧化应激状态等。病原菌的外膜囊泡10倍于非病原菌体。外膜囊泡具有疫苗开发中免疫调节潜力。通过差速离心和蛋白酶抑制混合剂，获得高纯外膜囊泡，充分保留其蛋白质的免疫和生物学活性。

    产品内容

    HEPENGBIO保存液（Reagent A） 10毫升
    HEPENGBIO溶解液（Reagent B） 5毫升
    HEPENGBIO活性液（Reagent C） 25微升
    产品说明书 1份

    保存方式

    保存HEPENGBIO活性液（Reagent C）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月

    用户自备

    50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
    1.5毫升离心管：用于样品保存的容器
    分光光度仪：用于测定细菌浓度
    台式离心机：用于样品操作
    超速离心机：用于样品操作
    恒温摇床：用于培养细菌细胞
    0.45微米滤膜：用于样品操作
    真空浓缩装置：用于样品操作


    实验步骤

    实验开始前，将试剂盒里的HEPENGBIO活性液（Reagent C）从－20℃的冰箱里取出，置入冰槽里冻融，然后移出1毫升HEPENGBIO溶解液（Reagent B）到1.5毫升离心管，加入5微升HEPENGBIO活性液（Reagent C），充分混匀，置于冰槽里，标记为HEPENGBIO溶解工作液。然后进行下列操作。
    1. 准备好1毫升过夜培养的新鲜细菌样品
    2. 移取500微升到50毫升细菌培养液（注意：用户可以进行诱导培养，例如无铁培养等）
    3. 放进37℃恒温摇床孵育过夜，速度为200RPM
    4. 在分光光度仪上测OD600为1（1 OD＝1 X 109细胞/毫升；总量为5 X 1010细胞）
    5. 转移到预冷的50毫升锥形离心管
    6. 放进4℃台式离心机离心30分钟，速度为5000g
    7. 小心移取上清液到新的50毫升锥形离心管
    8. 重复实验步骤6和7一次
    9. 使用0.45微米滤膜真空过滤一次
    10. （选择步骤）使用100kD蛋白临界点浓缩处理
    11. 放进4℃超速离心机离心3小时，速度为150000g
    12. 小心抽去上清液
    13. 加入200微升预冷的HEPENGBIO保存液（Reagent A）
    14. 或加入200微升预冷的含有HEPENGBIO溶解液（Reagent B）和HEPENGBIO活性液（Reagent C）的HEPENGBIO溶解工作液
    15. 用枪头上下抽吸，充分混匀
    16. 转移到新的预冷的1.5毫升离心管
    17. 即刻放进－70℃冰箱里保存或置于冰槽里备用
    18. 进行后续蛋白定量、荧光定量或电镜检测等

    注意事项
    1. 本产品为20次（50毫升菌液）操作
    2. 所有操作须在4℃状态下进行
    3. 建议使用新鲜细菌接种，培养到指数生长阶段为理想状态
    4. HEPENGBIO活性液（Reagent C）避免反复冻融
    5. 本产品按照50毫升培养菌液配制。如果操作不同菌液容量，可相应调整试剂用量
    6. 根据菌种不同，50毫升（OD600＝1）菌液可获得5至100微克外膜囊泡蛋白
    7. 制备产物如果放在－70℃冰箱里储存备用，严格避免反复冻融
    8. 本公司提供系列细菌试剂产品

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      以下操作按照天根产品 DP302 细菌基因组 DNA 提取试剂盒的说明书进行，所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品，样本量不同可能现象与本文有所差异。 实验准备： 1. 培养菌液1-5ml （本实验以革兰氏阴性菌为例，革兰氏阳性菌前处理详见说明书） 2. 移液器及配套无菌枪头（200 μl ，1ml） 1.5 ml 离心管 3. 无水乙醇 4. 涡旋振荡器，金属浴/水浴，台式离心机 实验准备-试剂盒准备 使用前先在漂洗液PW和GD中加入无水乙醇，加入体积请

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