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赫澎(上海)生物
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文献和实验【求助】新手 请问western-blot测NF-KB、FLT3是用总蛋白提取试剂盒吗
xungufeng820 各位大侠: 小弟是新手,师兄们也没做过的,不知western-blot测NF-KB、FLT3是用总蛋白提取试剂盒吗?急盼回复!万分感谢! snowxyh 我用过总蛋白提取试剂盒提蛋白,之后western-blot检测NF-KB,但是感觉这样得到的蛋白浓度很稀,需要比较大的上样量才能检测出来,个人感觉,还是用传统的细胞匀浆裂解,离心提取上清,这样得到的蛋白浓度大,做试验结果好
在 RIPA 不可溶组分中,如果样品又是研磨困难的组织样品,则优先选择对膜蛋白和小分子量蛋白提取效率更高且不需要匀浆仪的 Invent 柱式法工具进行总蛋白提取[1]。 * 目标蛋白在某个特定细胞器上(内质网,高尔基体,溶酶体,线粒体,内体等)表达,且蛋白表达量较低,若用总蛋白检测时条带较弱,则推荐使用 Invent 柱式法工具富集特定细胞器蛋白后再检测,提高检出效率。 * 研究蛋白定位或研究蛋白转运过程,推荐使用 Invent 柱式法工具进行细胞组分分离,将样品分离为不同组分如分成细胞核,细胞浆,细胞
实验室中时常听到这样的困惑,「明明通过免疫荧光(IF)能看到目的蛋白表达在细胞核膜上的表达,但为什么不论用总蛋白还是核蛋白进行 WB 检测,都无法检测到目的蛋白?」 类似这样的问题,你是否也深有感触? 实际操作过程中,是否遇到过免疫荧光有结果而蛋白印迹却没条带的情况?什么原因导致了这种情况?又该如何处理? 一、IF & WB 免疫荧光(IF)和免疫印迹(WB)都是利用抗原和抗体的特异性结合对目的蛋白质进行检测。IF 采用抗体和荧光检测固定细胞或组织中目的
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