- ￥2600
- 赫澎生物
- 上海
- HPBIO-JM195
- 2025年11月09日
企业认证
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
干燥密封保存
- 供应商：
赫澎（上海）生物
- 规格：
20次
产品内容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 80毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent B） 100微升
HEPENGBIO平衡液（Reagent C） 20毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存HEPENGBIO染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于真菌/酵母染色的容器
载玻片：用于染色观察
微型台式离心机：用于样品操作
培养箱或恒温水槽：用于染色孵育
比色皿或96孔板：用于荧光定量分析的容器
（共聚焦）荧光显微镜：用于细胞荧光分析
细胞流式仪：用于细胞荧光分析
荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于细胞荧光定量分析
实验步骤
- 菌液染色
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，HEPENGBIO平衡液（Reagent C）放进28℃恒温水槽里预热。然后移出10微升HEPENGBIO染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，加入990微升HEPENGBIO平衡液（Reagent C），混匀后，在冰槽里静置，并标记为HEPENGBIO染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。
- 准备好1毫升新鲜的酵母菌液（OD600＝1至2；1 X 107细胞/毫升）
- 移入到1.5毫升离心管
- 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为1000g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
- 小心抽掉上清液
- 加入1毫升预冷的HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀
- 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为1000g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
- 小心抽掉上清液
- 重复实验步骤5至7一次
- 加入500微升含有HEPENGBIO染色液（Reagent B）和HEPENGBIO平衡液（Reagent C）的HEPENGBIO染色工作液，混匀（注意：参见注意事项7）
- 放进28℃培养箱里或恒温水槽孵育20分钟，避免光照
- 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为1000g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
- 小心抽掉上清液
- 加入1毫升预冷的HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀
- 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为1000g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
- 小心抽掉上清液
- 加入500微升预冷的HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀
- 放进冰槽里
- 选择下列方式之一进行操作：
选择一、（共聚焦）荧光显微镜观察
- 混匀后，移出50微升在载玻片上
- 即刻进行载玻片压片，在荧光显微镜下进行观察（单滤波或双滤波）：
散发波长570nm或德州红（Texas Red）滤波器激发波长590nm，散发波长610nm――可见
亮红色荧光；如果强度显著减弱，表明线粒体膜电位受到破坏
观察绿色荧光：滤波器激发波长490nm，散发波长530nm或荧光素（Fluorescein）滤波器激发波长490nm，
散发波长520nm――如果绿色荧光强度显著增强，表明线粒体膜电位受到破坏，未结合JC
－1染料在细胞浆里
选择二、细胞流式仪分析
-
- 混匀后，即刻进行细胞流式仪双通道分析：观察50000个细胞以上
| 激发波长 | 488nm | 488nm |
| 匹配荧光染料 | 异硫酸荧光素（FITC） | 藻红蛋白（phycoerythrin；PE） |
| 荧光颜色 | 绿色 | 红色 |
| 散发波长 | 530 | 575 |
| 流式仪通道 | FL1 | FL2 |
| 荧光增强 | 膜损伤 | 膜电位正常 |
选择三、荧光分光光度仪或荧光酶标仪测定
- 混匀后，移出100微升到黑色96孔板里或100微升比色杯里
- 即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪测定（单一测定或双重测定）：
双重测定：激发波长490nm，散发波长590nm，获得红色荧光单位
激发波长490nm，散发波长530nm，获得绿色荧光单位――红色荧光单位除以绿色荧光单位终获得荧光比值：比值高表明线粒体膜电位正常
二、子实体染色
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO染色液（Reagent B
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文献和实验性起调节作用。很多凋亡的关键步骤包括caspase激活物的释放和电离子通道的改变，以及线粒体膜电位差的丢失等都发生于线粒体，因此线粒体 对凋亡的发生或抑制起重要作用。 (一)细胞色素C释放与凋亡复合体的形成 在研究哺乳细胞凋亡的生物化学反应时，发现某些位于线粒体内膜的蛋白可以直接启动细胞凋亡，并导致细胞色素C释放到细胞质或细胞核。被释放的细胞色素C可以和Apaf―1结合，改变其构象，大大增加后者与dATP／ATP的亲和性，并且使细胞色素C―Apaf―1形成多聚体。与此
：主要由微滴板载盒、滑板、传动带、滑轨和走板电机等组成。磁力传动可提高整机的密封性，微滴板载盒与其驱动机构之间由机壳左部的导板完全隔离。在磁力作用下，微滴板载盒在机壳左部的导板内来回运动，完成微滴板载盒的进退功能。 （3）压力和真空单元：主要由真空／压力泵、真空管路、压力管路、电磁阀、洗液瓶和废液瓶等组成。 （4）电源开关、处理器控制单元及外设：电源开关为电磁阀、升降电机，提供直流电源。处理器系统由单片机、程序存储器、数据存储器及相应的锁存译码芯片构成，通过I／O接口来控制键盘和显示屏等外设
rhodamine methyl ester(TMRM)等可结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。 方法：将正常培养的细胞和诱导凋亡的细胞加入使用终浓度为Rhodamine 123（1mM）或终浓度为DiOC6（25nM），JC-1（1mM），TMRM（100nM），37℃平衡30min，流式细胞计检测细胞的荧光强度。 注意事项 1、始终保持平衡染液中pH值的一致性，因为pH值的变化将影响膜电位。 2、与染料达到平衡的细胞悬液中如果含有蛋白，他们将与部分染料结合，降低染料
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