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细菌细胞趋化作用（chemotaxis）软琼脂检测试剂盒

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  • ￥2640
  • 赫澎生物
  • 上海
  • HPBIO-JM1194
  • 2025年11月09日
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    赫澎（上海）生物科技有限公司
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      干燥密封保存

    • 供应商：

      赫澎（上海）生物

    • 规格：

      10次

    趋化性（chemotaxis）是指细胞或生物体对于介质中的特定化学分子的浓度差异形成的刺激所引起的趋向运动。许多种类的游动细胞具有趋化性，例如细菌和阿米巴细胞朝着食物源移动；人体免疫细胞包括巨噬细胞和中性白细胞朝着外来入侵细胞移动。此外，许多在发育进程中发生的形态变化与细胞向化学物质浓度差异趋化移动相关。细菌趋化性是细胞感受化学信号，由膜结合受体连接到细胞内传递机制，通过鞭毛运动产生相应的移动反应。细菌趋化性检测包括时相（temporal）和空间（spatial）梯度检测。其中软琼脂群移平板检测（soft-agar swarming plate assay）是空间梯度分析的常用方法。作为半固体介质之一的琼脂糖（Agarose），构建化学趋化物（chemoattractant）弥散形成浓度差异的空间，观察细菌群移现象、环形（ring）标志，以及空白区域等外观形态，进一步分析野生型和突变型细菌，以及化学引诱分子（chemoattractant）和化学排斥分子（chemorepellent）的趋向变化。
    产品内容
    HEPENGBIO通用介质液（Reagent A） 毫升
    HEPENGBIO选择介质液（Reagent B） 毫升
    HEPENGBIO重悬液（Reagent C） 毫升
    产品说明书 1份
    保存方式
    保存在4℃的冰箱里；
    用户自备
    50毫升锥形离心管：用于混匀介质液的容器
    100mm培养皿：用于细菌趋化实验的容器
    恒温水浴：用于试剂保温
    微型台式离心机：用于样品操作
    培养箱：用于细菌培养
    量尺：用于测量细菌移动距离

    实验步骤
    • 琼脂平板准备
    1. 将HEPENGBIO通用介质液（Reagent A）或选择HEPENGBIO介质液（Reagent B）置于微波炉里加热溶化（注意：避免溢出）
    2. 放进50℃恒温水浴
    3. 移出xx毫升HEPENGBIO通用介质液（Reagent A）或HEPENGBIO选择介质液（Reagent B）到50毫升锥形离心管
    4. 即刻加入1毫升用户自备的待测的化学趋化分子
    5. 上下倾倒混匀
    6. 快速度倒入100mm培养皿
    7. 均匀铺满整个底面，避免气泡产生
    8. 置于室温下至少2小时或4℃冰箱里1小时，使胶体凝固
    9. 倒置培养皿，在其外底面，用尺和标记笔做好标记――根据检测要求设置如下：
    1）一板多点
    2）一板单点
    • 细菌准备
    1. 准备10毫升过夜生长的新鲜的培养细菌（OD590=0.4，达5 X 107细菌/毫升）
    2. 移取1毫升到新的1.5毫升离心管
    3. 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为1000g
    4. 小心抽掉上清液
    5. 加入xx毫升HEPENGBIO重悬液（Reagent C），混匀
    6. 置于冰槽里备用
    • 趋化实验
      1. 加入10微升上述准备的待测细菌到相应的标记点位
      2. 室温下静置30分钟
      3. 小心倒置放进35℃培养箱孵育6至8小时（一板多点）或24至48小时（一板单点），保持培养箱湿润
      4. 观察细菌群移现象：建议每隔2小时观察1次
      5. 直至出现趋化环
      6. 结果分析：
        1. 使用量尺进行细菌移动距离测量：细菌点和细菌趋化环之间的距离
        2. 细菌趋化环密度计量：包括所有移动细胞，或设定移动区域的细胞
      7. 构建距离、密度、时间、趋化物浓度包括空白对照的关系曲线
      8. 确定趋化系数（chemokinesis coefficiency）：趋化物浓度和细菌移动密度的关系曲线的斜率

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    • 白细胞的渗出和吞噬作用

      细胞的游出。此外，由于致炎因子不同，渗出的白细胞也不同：常见的葡萄球菌和链球菌感染，以中性粒细胞渗出为主；病毒感染以淋巴细胞为主；在一些过敏反应，则以嗜酸性粒细胞渗出为主。 趋化作用（chemotaxis）是指白细胞向着化学刺激物所在部位作定向移动，移动速度约每分钟5～20μm。这些化学刺激物称为趋化因子。研究白细胞的趋化作用可采用微孔滤膜Boyden小室技术的和显微缩时摄影技术记录白细胞的运动轨迹。研究发现，趋化因子的作用是有特异性的，有些趋化因子只吸引中性粒细胞，而另一些趋化因子则吸引单核

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