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文献和实验的PCR端粒酶活性检测试剂盒基于同样的的原理,利用银染技术检测端粒酶的活性。阳性结果在凝胶电泳上显示相隔6bp 的梯状条带,条带的多、寡、深或浅表示端粒酶活性的大小。TRAP-银染法保留了传统TRAP 法灵敏度高、特异性强等优点,避免了同位素的放射污染。同时,还增设了内标准物,提供阳性对照品,优化了引物设计,使PCR效果进一步提高,使之能够高灵敏的检测到细胞和组织提取物中端粒酶的活性。 TRAP-银染法端粒酶活性检测试剂实验方法 试剂盒组份 组分 50 次实验量
低水平端粒酶活性[8~11]。荧光法的另一应用是于原位—TRAP分析,可以在细胞水平上检出端粒酶活性,因此可以判定是哪些细胞、多少细胞具有端粒酶活性,而裂解提取法不能知其活性的细胞来源。原位分析在硅化玻片上进行,荧光显微镜下观察结果。目前只用于新鲜标本,用冻存病理标本的实验尚不成功,需改进方法防止冻融中胞内端粒酶的分散及增加标本的渗透性等。 3.4 ELISA法 TS引物5′端标以生物素,PCR扩增后,将产物变性,加入地高辛标记的可与扩增产物的重复片断特异结合的探针,杂交产物上的生物
相关专题 1994年,Kim发明的TRAP由于具有灵敏度高等优点曾被广泛应用于端粒酶 的活性检测中,不过安全性不够,现在的端粒酶活性检测实验都在其基础上进行了改良,更显高效和人性化。以下是具体的实验方法: 端粒是真核生物染色体末端的特异DNA -蛋白结构,端粒DNA是一系列重复的富含G的DNA序列,这一序列在生物进化中有高度的保守性(人重复序列为TTAGGG)。已确认端粒在保护基因组DNA不被降解、防止染色体有害
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