- ￥2200
- 赫澎生物
- 上海
- HPBIO-JM739
- 2025年11月04日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
干燥密封保存
- 供应商：
赫澎（上海）生物
- 规格：
100次
产品内容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent C） 微升
HEPENGBIO去干扰剂（Reagent D） 毫升
HEPENGBIO保存液（Reagent E） 毫升
产品说明书 1份
保存方法
保存HEPENGBIO去干扰剂（Reagent D）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；HEPENGBIO染色液（Reagent C）避免光照，有效保证6月
用户自备
HANKS平衡盐溶液（HEPENGBIO12022）或PBS缓冲溶液（HEPENGBIO12033）：用于清洗细胞
胰蛋白酶乙er胺四乙酸混合液（HEPENGBIO12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（HEPENGBIO12052）：用于中和胰蛋白酶的处理
15毫升锥形离心管：用于细胞收集的操作
1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器
台式离心机：用于细胞收集的操作
细胞流式仪：用于细胞荧光分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO去干扰剂（Reagent D）置入冰槽里融化。移出xx微升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent C）和xx微升HEPENGBIO去干扰剂（Reagent D），混匀后标记为1号工作液；再移出xx微升HEPENGBIO保存液（Reagent E）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent C），混匀后标记为2号工作液。工作液置于暗室里，避免光照。然后进行下列操作。
- 准备1瓶25cm2细胞培养瓶的待测细胞，铺满率达70％（约1百万细胞数）
- 小心移出细胞培养液到15毫升锥形离心管（收集漂浮细胞）
- 加入2.5毫升用户自备的HANKS平衡盐溶液或PBS缓冲溶液到细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面
- 小心移出2.5毫升清洗液到上述15毫升锥形离心管
- 加入1毫升胰蛋白酶乙er胺四乙酸混合液到细胞培养瓶，铺满整个培养平面
- 置入37℃培养箱1分种
- 振动培养瓶，使细胞脱落，然后加入5毫升用户自备的完全细胞培养液
- 移入到上述15毫升锥形离心管（悬浮细胞从这一步骤开始）
- 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g
- 小心抽去上清液
- 加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）到15毫升锥形离心管，混匀
- 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g
- 小心抽去上清液
- 加入500微升1号工作液，用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群（可以移入到1.5毫升离心管或细胞流式仪专用测试管）
- 在暗室里室温下孵育60分钟
- 加入500微升2号工作液，用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀
- 移入到细胞流式仪专用测试管（可放进4℃冰箱里待测）
- 即刻进行细胞流式仪分析：波长488nm氩离子激光（或488nm激发波长，610nm散发波长），观察50000个细胞以
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文献和实验1、Q：要做胃粘膜组织的DNA含量及倍体检查，但取材后要等几个星期才会做流式细胞术检查，请问：胃组织要怎样保存好呢？用低温保存，还是用乙醇固定？或者固定后再低温下保存？ A：我做过乳腺细胞的DNA含量测定，取得组织以后，先处理成单细胞悬液，然后再加70%冰乙醇固定，要保证冰乙醇的最终浓度为50%，这样固定的细胞悬液可以至少保存12小时，最多可保存一个月，上机检测前再加PI综合染液。我就是这样做的，保存了将近三个星期，结果还可以，变异系数为5%. 2、实验中想用PI分析细胞周期
有用，因为这有可能阐明有关的途径，并确定功能基因网络。我们在HLR-CHOP细胞中进行siRNA筛选，以确定控制细胞周期调控和凋亡的基因。在两种筛选中，通过转染siRNA而下调基因，在细胞周期分析中在7-AAD染色后用流式细胞术分析对DNA内容的影响，在凋亡分析中分析对天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3激活的影响。在细胞周期分析中，通过RNAi对DONSON和GDF3的下调导致细胞周期G1期的阻断。为了描述这两个基因在细胞周期调控中的进一步作用，我们在抑制DONSON和GDF3基因后用qRTPCR分析了一组91
Q：Annexin V 凋亡检测试剂盒的原理是什么？ A：Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的 PS 与凋亡早期细胞胞膜结合，将 Annexin V 标记荧光染料如 FITC 利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或 7-AAD 可与双链 DNA 特异性结合，并产生强烈的荧光，正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，核染料 PI 或 7-AAD
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