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赫澎(上海)生物
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文献和实验细胞培养物污染往往是细胞培养实验室中最常见的问题,有时会造成非常严重的后果。细胞培养污染物可分为两大类,一类是化学污染物,如培养基、血清和水中的杂质,包括内毒素、增塑剂和洗涤剂,另一类是生物污染物,如细菌、霉菌、酵母、病毒和支原体,以及其他细胞系的交叉污染。虽然污染无法完全消除,但可以通过全面了解其来源并遵循良好的无菌技术来降低污染的发生频率和严重性。本文将概述主要的生物污染类型。 细菌 细菌是一大类普遍存在的单细胞微生物。细菌的直径通常只有几微米,其形状多样,如球状、杆状和螺旋状等。由于分布
要的。对于确定污染的细胞最好的办法就是及时丢弃,积极排查细胞污染的原因,除非是特别重要的细胞才会去抢救,而且抢救污染的细胞本来就有一定的风险,搞不好还可能会污染别的细胞。下面进入正题,一般细胞污染大概分为细菌污染、真菌污染、支原体污染还有说法不一的黑胶虫污染等。每种污染的特征都很明显,因为微生物种类实在太多,所以我就选取比较典型和常见的污染讲下。识别细胞污染的第一步就是从培养箱拿出细胞后观察细胞培养液的颜色,以常用的 DMEM 基础培养液为例,一般使用 DMEM 配制的培养液的颜色为鲜红色,而且是澄清透亮
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合,将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失,细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核,搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A.悬浮细胞: 按照实验方案进行凋亡诱导,300 g离心5 min,弃上清,收集细胞,用PBS洗涤细胞一次,轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
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