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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期:
6-12months
- 英文名:
Recombinant Phosphoinositide-3-Kinase Catalytic Beta Polypeptide (PIK3Cb)
- 库存:
大量
- 供应商:
泽叶生物
- 规格:
50ug/100ug/1mg
上海泽叶生物科技有限公司是一家集研发、生产和销售于一体的生命科学实验室产品创新性高科技企业。主要从事免疫学,重组蛋白,细胞因子,抗原/多肽/蛋白等产品主要包括免疫调节蛋白、白细胞介素、CSFs、生长因子、干扰素、Chemokines 、Adipokines 、TGFß / BMP Proteins、神经因子、FGFs和TNF配体/受体防御因子等。并代理销售Amresco,qiagen Millipore,eBioscience,Sigma,SANTA,Sciencell,R&D、GBD、ATCC、HYCLONE, CELLutions Biosystems INC , Neuromics , Chemicon, Equitech-bio, Biovision, Promega, Kamiya, Prospec, Cytoskeleton, Novagen, SurModics, Cytelligen LONZA等二十多家国外知名品牌,致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供一流的科研试剂和完善的技术服务。
经甲醛固定的部分组织细胞,因固定过程中可能会形成醛键或羧甲基而封闭部分抗原决定簇,使免疫组化标记敏感性明显降低,因此在染色前,有些抗原需进行修复或暴露。
抗原修复方法可分为化学方法和物理方法。化学方法是以酶消化方法,常用胰蛋白酶及胃蛋白酶,配制浓度与消化时间要适度。常用的物理方法有单纯加热、微波处理和高压加热。在选用这三种方法时,浸泡切片的缓冲液的离子强度和pH、加热的温度和时间均影响着抗原修复效果。
1、pH的应用范围及选择
抗原修复液的pH非常重要,有效的抗原修复pH要比修复液的化学成分更重要,同样的修复液随着pH的升高染色的强度逐渐增强,但最佳pH范围为6.0-10.0。目前大家公认的最好的抗原修复液是pH6.0的柠檬酸盐缓冲液和pH8.0的EDTA缓冲液。作为通用修复液碱性pH的修复液要比酸性的有效,而对固定很长时间旧的存档组织,酸性pH的修复液则优于碱性的修复液。
2、抗原修复时应选择最佳温度
70-90℃的温度对未经固定的蛋白质可发生变性,但经福尔马林固定的蛋白质,温度必须达到92℃以上方能使其变性。研究结果显示,温度为92-98℃是合适的,95℃效果最好。
3、抗原修复液必须遵循自然降温规律,否则效果不好或达不到抗原修复的目的
抗原修复持续时间过后,取出放于室温中让其慢慢地降温,绝对不能为了争取时间,强行用冰块或冷水使其降温。这是因为当高温中的抗原蛋白分子链脱离了其他的束缚或联结,要有一个自然环境让其自然放松下来,随着温度的降低,它们会慢慢地恢复原来的形态和构型。
4、尽量使用足量的抗原修复液
应用于抗原修复的液体,一定要充足,防止切片干涸。应用大量的抗原修复液时,由于它的量较大,可延缓液体的沸腾时间,增加切片受微波辐射的量,对抗原修复将达到彻底。
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文献和实验Mol Cell:杨薇等揭示 DNA-PK 的激活机制以及自磷酸化对 NHEJ 通路的重要作用
and Rad3-Related)三种激酶。 其中,DNA-PK 是非同源末端连接(Non-homologous end joining,NHEJ)通路中的关键蛋白激酶,由 DNA-PKcs(DNA-PK 催化亚基)、Ku70/80 和 DNA 末端组成,其全酶装配会进一步招募 NHEJ 相关的连接酶和修复蛋白,包括 DNA 连接酶 IV、XRCC4(X-ray cross complementing protein 4)、XLF(XRCC4-like factor)和 Artemis 等。 由于激酶
,能与配体直接结合,对 Hh 信号起负调控作用。受体 Smo 由原癌基因 Smothened 编码,与 G 蛋白偶联受体同源,由 7 个跨膜区的单一肽链构成,N 端位于细胞外,C 端位于细胞内,跨膜区氨基酸序列高度保守,C 末端的丝氨酸与苏氨酸残基为磷酸化部位,蛋白激酶催化时结合磷酸基团。该蛋白家族成员只有当维持全长时才有转录启动子的功能,启动下游靶基因的转录。
趋化因子受体信号传递 趋化因子受体与相应配体结合后引发胞内复杂的信号转导级联反应。第一步是受体与其高亲和力配体的结合,引起构象变化导致受体关联的G蛋白异三聚体分解为α和βγ亚基,α和βγ亚基作为第二信使激活随后的一系列效应酶,如磷脂酶C和蛋白激酶。 主要的趋化因子受体、配体及其分布 磷脂酶C可引发磷酸肌醇C信号通路和胞内Ca2+浓度的增加。这个信号转导级联反应不仅可以调节肌动蛋白依赖的细胞
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