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EASYspin 组织/细胞RNA快速提取试剂盒

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  • ￥540
  • 艾德莱/aidlab
  • 国产
  • RN0702
  • 2025年12月29日
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      室温

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      充足

    • 供应商：

      杭州昊鑫生物

    • 规格：

      50次

    RN07-EASYspin 组织/细胞RNA快速提取试剂盒

    产品介绍：

       独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

    产品特点：

    1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
    2.不需要使用有毒的phenol，,氯仿，beta巯基乙醇等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
    3. 快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。
    4. 多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.0，基本无DNA残留,可用于RT-PCR，Northern-blot和各种实验。

    目录号: RN07
     
    ❖ 试剂盒组成、储存、稳定性:
     
    试剂组成 保存 50 次 (RN0701)
    裂解液 RLT 室温 30 ml
    去蛋白液 RW1 室温 35 ml
    漂洗液 RW 室温 10 ml（第一次使用前按瓶子标签指示加无水乙醇）
    RNase-free H₂O 室温 5 ml
    RNA 吸附柱和收集管 室温 50 套
     
    本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。
     
    储存事项:
    1. 不合适的储存于低温（4℃或者 - 20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下进行。
    2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
    产品更新提醒：旧版操作步骤中加入等体积 70% 乙醇，改成加入 0.5 倍体积无水乙醇。因此试剂盒不再需要 70% 乙醇瓶子这个组分了。
    ❖ 注意事项
    1. 所有的离心步骤均在室温完成。使用转速可以达到 13,000 rpm 的传统台式离心机。
    2. 裂解液 RLT 和去蛋白液 RW1 中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
    3. 样品处理量不要超过 RNA 吸附柱的处理能力，否则反而可能造成产量降低。不同组织细胞种类 RNA/DNA 相差极大，例如胸腺脾脏 DNA 含量丰富，超过 5 mg 就会超过柱子处理能力。COS 细胞 RNA 含量丰富，超过 3×10⁶细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时，如果不清楚样品 DNA/RNA 含量时宁可使用较少的样品处理量，如细胞不超过 3-4×10⁶，组织不超过 10 mg。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
    4. 关于 DNA 的微量残留：
       
      一般说来任何总 RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免 DNA 的微量残留（DNase 消化也无法做到 100% 无残留），本公司的 EASYSpin RNA 提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组 DNA 清除柱技术，绝大多数 DNA 已经被清除，不需要 DNase 消化，可直接用于反转录 PCR 和荧光定量 PCR。个别特殊情况如 DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的 mRNA 表达量分析荧光定量 PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：
       
      ▲选用跨内含子引物，以穿过 mRNA 中的连接，这样 DNA 就不能作为模板参与扩增反应。
       
      ▲选择基因组 DNA 和 cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。
       
      ▲将 RNA 提取用 RNase-free 的 DNaseⅠ 处理以提高效果。本试剂盒还可以用于 DNaseⅠ 处理后的 RNA 清洁 (cleanup)，请联系我们索取具体操作说明书。
       
      ▲在步骤去蛋白液 RW1 漂洗前，直接在吸附柱 RA 上进行 DNaseⅠ 处理。请联系我们索取具体操作说明书（艾德莱DNA酶柱上消化试剂盒货号：RN34）。
    5. RNA 纯度及浓度检测:
       
      完整性: RNA 可借用普通琼脂糖凝胶电泳（电泳条件：胶浓度 1.2%；0.5×TBE 电泳缓冲液；150V，15 分钟）检测完整性。由于细胞中 70%-80% 的 RNA 为 rRNA，电泳后 UV 下应能看到非常明显的 rRNA 条带。动物 RNA 大小分别约为 2kb 和 1kb，分别相当于 28S 和 18S rRNA。动物 RNA 样品中最大 rRNA 亮度应为次大 rRNA 亮度的 1.5-2.0 倍，否则提示 RNA 样品的降解。出现小的弥散片状条带消失表明样品严重降解。但是应该注意电泳过程中降解的 RNA 样品本身降解了，还是提取出来的 RNA 是完好的，只是在区分是提取出来的。
       
      纯度: OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的 RNA，OD260/OD280 读数在 2.1-2.2 之间 (100% 纯的 RNA 比值一般是 2.2 左右 (100% 纯的 RNA 比值一般是 2.2 左右，很多公司的产品因为残留蛋白或者 DNA 较多，造成比值降低，无法达到 2.2 这个纯度标准，因此降低到 1.9-2.0)。OD260/OD280 是艾德莱的产品标准一般可以达到高水准的 2.1-2.2 的纯度标准)。读数使用了，读数受测量使用的机器影响，也要测定所用稀释溶液的 pH 值影响。微量分光光度计一般不需要稀释，不受稀释溶液的 PH 值影响。
       
      浓度: 取一定量的 RNA 提取物，用 RNase-free ddH₂O 稀释 n 倍，用 RNase-free ddH₂O 取为分光光度计调零，取稀释液进行 OD260,OD280 测定，按照以下公式进行 RNA 浓度的计算：终浓度（ng/μl）= (OD260)×(稀释倍数 n)×40。
       
      ❖ 操作步骤:（实验前请先阅读注意事项）
       
      → 第一次使用前请先按漂洗液 RW 瓶标签指示加入无水乙醇充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入！

      一、样本处理

      A. 贴壁细胞:

      无需消化，吸除细胞培养基上清后可直接在培养皿中立即加入 500 μl 裂解液 RLT 消化裂解（可用移液器反复吹打帮助裂解）；不方便直接裂解的培养容器，可以用细胞刮子刮下细胞，或者胰酶消化后离心收集细胞，去上清，细胞沉淀中加入 500 μl 裂解液 RLT（<8×10⁵个细胞），涡旋震荡或移液吹打直至完全无明显细胞团即可。
       
      ▲贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶（皿）脱落，这并不意味着裂解不完全，此时细胞膜实际已经完全破开，并已释放出全部 RNA，继续做即可。

      B. 悬浮细胞:

      直接离心收集细胞，13,000 rpm 离心 10 sec，使细胞沉淀下来，吸除上清后加入 500 μl Buffer RLT（< 8×106 个细胞），涡旋震荡或移液器吹打直至无明显细胞团即可。
      C. 动物组织:
       
      取新鲜组织约 15-25 mg（<30 mg）加入 500 μl 裂解液 RLT，用玻璃匀浆器或电动匀浆器将组织研磨均匀。若用液氮研磨，在液氮中研磨组织成粉末后，取适量组织细粉 15-25 mg（<30 mg）转移至预装有 500 μl Buffer RLT Plus 的 1.5 ml 离心管，涡旋震荡或移液管吹打直至无明显细胞团即可。
       
      ▲若研磨匀浆后不溶物碎片太多，可将匀浆后裂解物 13,000 rpm 离心 3 min 沉淀可能存在的裂解困难的碎片或者不溶物。将上清液转移到新的 1.5 ml 离心管内。

      二、RNA 提取

      1. 向匀好的匀浆液中加入 0.5 倍体积的无水乙醇（约 250 μl），涡旋震荡混匀或者移液管吹打混匀。
         
        ▲若加乙醇后出现浑浊或有絮状物产生，属正常现象，立即吹打混匀，不要离心。
      2. 立即将上述混合液加入至 RNA 吸附柱内 (已放入收集管中), 静置 1 min，13,000 rpm 离心 30 sec，弃滤液，将吸附柱放回收集管。
      3. 向吸附柱中加入 700 μl 去蛋白液 RW1，室温放置 30 sec，13,000 rpm 离心 30 sec，弃滤液。
      4. 向吸附柱中加入 500 μl 漂洗液 RW（使用前请检查是否已加入无水乙醇），13,000 rpm 离心 15 sec，弃滤液。
      5. 重复步骤 4 一遍。
      6. 将吸附柱放回收集管中，13,000 rpm 空离心 2 min。尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
      7. 将吸附柱转移至新的 1.5 ml 离心管中，向吸附柱膜中央悬空滴加 30-50 μl RNase-free ddH₂O，静置 1 min，13,000 rpm 离心 1 min。
         
        ▲洗脱体积建议不少于 30 μl，体积过大会影响核酸回收效率。
         
        ▲以下步骤都可以帮助提高 RNA 产物浓度:
         
        RNase-free ddH₂O 于洗脱前先在 70-90℃预热；
         
        将第一次洗脱液重新加入吸附柱进行第二次洗脱。
      8. 提取的 RNA 可直接用于下游实验或 - 85℃～-65℃保存。


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    图标文献和实验
    该产品被引用文献

    ListerinAlleviatesAlzheimer’sDiseasethroughIRE1-mediatedDecayofTLR4mRNA（Listerin 经 IRE1 依赖的 TLR4 mRNA 降解缓解阿尔茨海默病）

    引用文献图片1

    使用该产品发表的部分文献：

    1.Expression and epigenetic dynamics of transcription regulator Lhx8 during mouse oogenesis. Gene, 2012, 506(1): 1-9
    2.Primordial follicle assembly was regulated by notch signaling pathway in the mice. Mol Biol Rep (2014) 41:1891–1899. DOI 10.1007/s11033-014-3038-4.
    3.Three homologous genes encoding functional D8-sphingolipid desaturase in Populus tomentosa. Genes Genom. DOI 10.1007/s13258-013-0167-4.
    4.Anti-senescence effect of FatI gene in goat somatic cells. This article is protected by copyright. All rights reserved. Doi: 10.1002/bab.1219.
    5.Molecular characterization of a 14-3-3 zeta gene from Plodia interpunctella: A potential marker for phylogenetic inference. Biochemical Systematics and Ecology 2015, 60:171-176
    6.Molecular cloning and expression analysis of a myosin light chain 1 (MLC-1) gene from Indian meal moth Plodia interpunctella (Lepidoptera: Pyralidae). Entomological Research 2015, 45: 305-313
    7.Small Heat Shock Proteins and Eicosanoid Pathways Modulate Caspase-1 Activity in the Fat Bodies of Antheraea pernyi. first posted online September 3, 2015; 
    8.Detection of pepper mild mottle virus in pepper sauce in China. Archives of Virology 2015, 160(8): 2079-2082
    9.Identification and expression of an ecdysteroid‑responsive amylase from red crayfish Procambarus clarkii. Fish Sci. 2015, 81:345–352
    10.14.Molecular characterization of a 14-3-3 zeta gene from Plodia interpunctella: A potential marker for phylogenetic inference. Biochemical Systematics and Ecology 2015, 60: 171-176
    11.Severe hypertriglyceridemia due to two novel loss-of-function lipoprotein lipase gene mutations (C310R/E396V) in a Chinese family associated with recurrent acute pancreatitis. Oncotarget 2017, 18(29): 47741–47754.
    12.Zearalenone exposure impairs ovarian primordial follicle formation via down-regulation of Lhx8 expression in vitro. Toxicology and Applied Pharmacology 2017, 317: 33-40 微量6卵巢

     

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