A549细胞

细胞名称：A549 人非小细胞肺癌细胞
组织来源：肺癌
培养条件：RPMI-1640 +10% FBS
形 态：贴壁；上皮细胞样
A549细胞提供原代/传代细胞，质量保证，生长状态良好，没有细菌 真菌 支原体等微生物污染。细胞一般以T25培养瓶包装，容积75ml细胞数量可达10的6次方左右。购买方收到细胞应当马上检查，如发现细胞状态不佳或者大部分死亡情况下，须当天联系我司。得到我技术确认后免费补发一株。一周内发现细胞有污染情况，请拍照记录并与销售部联系。

A549细胞的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。我认为有以下几点需要注意：
（1）冻存前细胞状态，细胞最好在对数生长期，细胞密度适合，刚刚发生细胞融合，过密或连成片的细胞状态不好，而且消化时不容易分散；
（2）冻存的密度不宜过低，10的6次方-7次方的数量级比较好，我冻存的细胞一般T25培养瓶（5*107），一瓶冻一管（1.5ml冻存管），10cm培养皿（大概10的8次方个细胞）分成两管。
（3）A549细胞消化和吹打，切忌胰酶消化过度，吹打不可太用力，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入完全培养基吹打哦，不是加入冻存液再吹打。
（4）离心后加入冻存液。冻存液中FBS的用量对于肿瘤细胞株而言要求不是很严格，我从10%-90%都用过，问题不大，个人认为10%-20%可以了，能节约处就节约点嘛！另外，冻存液可以在处理细胞前配置，放在4度冰箱预冷。细胞离心后直接用预冷的冻存液重悬，移入冻存管。
（5）关于“慢冻”，传统的方法，A549细胞冻存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更长，-80度过夜，最后液氮。对于条件较好的实验室和细胞冻存数量多的实验室，推荐使用程序降温盒，内装异丙醇，在-80度并内可以逐渐降温，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。