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- 2026年04月19日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 服务名称：
大鼠脂肪间充质干细胞原代培养
- 提供商：
威斯腾生物
大鼠，北京华阜康生物科技股份有限公司。
二、主要仪器及试剂
| 80/150/200目不锈钢细胞筛 | 上海生工，中国 |
| 电热压力蒸汽消毒器 | 浙江绍兴医疗器械总厂 |
| 超净工作台 | 苏州净化设备公司 |
| 二氧化碳培养箱 | 三洋（Sanyo），日本 |
| 电热恒温鼓风干燥箱 | 上海跃进医疗器械厂 |
| 低速台式离心机 | 上海安亭科学仪器厂 |
| 倒置显微镜 | OLYMPUS，日本 |
| 照像系统 | OLYMPUS，日本 |
| 移液器 | Eppendorf，德国 |
| 细胞计数板 | 上海医用仪器厂 |
| 细胞培养瓶及细胞培养板 | Costar，美国 |
| 各种型号塑料离心管、移液枪头和冻存管 | Axygen，美国 |
| 0.22um纤维素滤膜 | MILLIPORE，美国 |
| 0.45um混合纤维素滤膜 | MILLIPORE，美国 |
| 剪刀、镊子 | 中山恒基达医疗器械 |
| DMEM培养基 | Gibco，美国 |
| 胎牛血清（FBS） | Gibco，美国 |
| 胰蛋白酶 | 碧云天，中国 |
| PBS | 北京中杉 |
| 青霉素-链霉素溶液（100X） | 碧云天，中国 |
| DMSO | Amresco，美国 |
（1）PBS磷酸盐缓冲液： PBS粉剂每袋加ddH2O定容至1000mL，调pH7.2，121℃，30min高压灭菌，4℃冰箱保存。
（2）DMEM细胞生长培养液：临用前根据需要按体积比10%加胎牛血清，最后按1％体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U/mL和100 U/mL，再加入5ng/mL的SCF，置于4℃冰箱保存。
（3）细胞冻存液：生长培养基（含20%胎牛血清）或100%胎牛血清，加入10%的DMSO混合均匀，置于4℃冰箱保存。
三、实验步骤
1. 取大鼠，麻醉，在无菌条件下迅速取出脂肪组织。
2. 用含１％青链双抗的D-Hank’s 液冲洗3次。剥离脂肪组织上的血管。
3. 将脂肪组织剪碎，直到组织变为液体状，加入8-10mL 胰酶，37℃消化90min。
4. 消化完成后，加入等量含血清DMEM 培养基终止消化，过200目筛网去除大块组织
5. 以1500r/min 离心5min，去上清液，加入含血清DMEM 培养基重悬细胞。
6. 接种至６ 孔板，放入细胞培养箱（37℃，CO2 浓度5％）。细胞稳定培养24h后换液，冲去未贴壁的细胞，更换DMEM培养基（成分同上）继续培养。以后每2天换液１ 次，注意观察培养基有无浑浊、颜色变淡、漂浮物和絮状物等
四、细胞形态
大鼠脂肪间充质干细胞培养过程中，约24h即可贴壁生长，细胞呈长梭形生长速度较慢。换液后细胞增殖明显，出现以长梭形为主的形态，5- 7d 70%-80%可融合达到传代标准。传代细胞形态单一，呈长梭形。
五、威斯腾生物服务流程
六、威斯腾生物服务项目
| 分子生物学类 | 蛋白质与免疫学 | 动物实验 |
| 实时荧光定量PCR | 单克隆抗体制备 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗体制备 | 抑郁症动物模型 |
| ELISA（酶联免疫吸附法）技术 | Western-blot 实验服务 | 脊髓损伤模型 |
| 生化指标检测 | 蛋白双向电泳实验服务 | 脑外损伤模型 |
| 双荧光素酶报告基因检测 | 原核蛋白表达纯化 | 骨神经损伤模型 |
| 染色质免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表达纯化 | 心肌缺血模型 |
| GST pull Down | ITRAQ定量蛋白质组学 | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白组学 | 肺动脉高血压动物模型 | |
| 高血压模型 | ||
| 病毒包装服务 | 实验课题整体外包 | 粥样动脉硬化模型 |
| 过表达/干扰慢病毒包装纯化 | 整体课题外包 | 大脑中动脉阻塞模型 |
| 过表达/干扰腺病毒包装纯化 | 细胞整体实验外包 | 慢性之气管炎模型 |
| 逆转录病毒包装纯化 | 动物整体实验外包 | 过敏性哮喘模型 |
| 腺相关病毒包装纯化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代细胞培养 | 肝纤维化模型 |
| 细胞因子芯片 | 骨髓间充质干细胞培养 | 胆结石模型 |
| 生长因子芯片 | 脂肪干细胞培养 | 急性胰腺炎模型 |
| 信号通路磷酸化水平检测芯片 | 心肌成纤维细胞培养 | 急性肾衰竭模型 |
| BioPlex悬浮芯片 | 软骨细胞培养 | 体内血栓模型 |
| 生长因子芯片 | 血管内皮细胞培养 | 关节炎模型 |
| 炎症因子芯片 | 神经元细胞培养 | I型和II型糖尿病模型 |
| 血管生成因子芯片 | 内皮组细胞原代培养 | 裸鼠成瘤 |
| 凋亡因子芯片 | 基因编辑动物 | |
| 趋化因子芯片 | 电生理相关服务 | 动物整体实验服务 |
| HuProt TM 20K人类蛋白组芯片 | 膜片钳实验 | |
| 细胞生物学 | 高通量测序 | 代谢组学 |
| 细胞原代培养 | mRNA测序 | 气相色谱GC/MS |
| MTT检测 | LncRNA测序 | 液相色谱LC/MS |
| 细胞凋亡检测 | 全基因组测序 | 核磁共震NMR |
| 细胞周期检测 | RNA-Seq测序 | |
| 细胞克隆形成实验 | 外显子测序 | 影像学相关实验 |
| Transwell细胞迁移/侵袭 | 16s扩增子测序 | Micro-CT |
| 流式分选 | Small RNA测序 | 小动物活体成像 |
| CCK8/XTT检测 | 宏基因组测序 | 核磁共振 |
| 台盼蓝检测细胞活性 | 单细胞测序 | PET-CT |
| 药物筛选细胞学实验 | circleRNA测序 | |
| 细胞粘附性检测 | 甲基化测序 | 基因编辑动物 |
| 细胞划痕实验 | 条件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞生物学整体实验 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞成管实验 | ||
| 病理检测 | CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 扫描电镜 | 基因定点突变细胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射电镜 | 单基因敲除细胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除细胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫组化 | 目的基因敲入细胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠来源样本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）检测 | 报告基因敲入细胞系 | SNP芯片（限人和小鼠来源样本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除细胞系 | |
| 免疫荧光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9动物敲除/敲入 | 科研方案设计与SCI相关服务 |
| 原位杂交 | 基因敲除大鼠/小鼠 | 科研文献论著翻译 |
| 荧光原位杂交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | SCI论文翻译润色服务 |
| 特殊染色（PSA、茜素红、阿尔新蓝等） | 临床实验/科研实验设计方案指导 | |
| 行为学检测 | 药物筛选服务项目 | 药效学评价 |
| 水迷宫实验 | 高通量自动药物筛选平台 | 神经系统药物药效学评价 |
| 旷场实验 | 细胞高内涵药物筛选平台 | 抗肿瘤药物药效学评价 |
| 重复性刻板行为检测 | 蛋白质组学靶标研发平台 | 心血管系统药物药效学评价 |
| 动物跑台检测 | 分子药理研究平台 | 泌尿系统药物药效学评价 |
| 强迫游泳 | 生物膜片钳药物筛选平台 | 内分泌系统药物药效学评价 |
| 常规药物体外筛选 | 抗炎免疫药物药效学评价 |
【本平台合作项目】
分子生物学、细胞生物学、基因敲出/入、模式动物、SPF动物保种、病理学检测、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！
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文献和实验创刊 3.代谢组学的应用与发展 3.1 代谢组学促进多学科，多领域交叉发展 代谢组学的不断发展，促使分子分离和检测仪器，结构解析的制造商以及相关科学家们需要不断地研发出各种针对代谢组学的硬件、软件和技术支持。也就意味着需要不同领域和学科的技术支持，特别是基于分析化学的结构解析方面。同时，在代谢组学的发展中至关重要的是基于计算机科学（程序语言）的大数据处理和分析。因此，代谢组学的发展离不开多科学、多领域的技术发展。 3.2 代谢组学在医学领域中的应用 新药的筛选和开发：新药研发存在风险高
色谱与质谱联合而达到检测大分子物质的目的。 3.代谢组学发展趋势 代谢组学是定量描述生物内源性代谢物对内外因变化应答规律的科学，能够直接反映生命体的终端和表型信息，近年来在疾病诊断和分型、生物标志物发现、药物研发、基因功能解析、代谢途径及调控机理等领域发挥着重要作用。从代谢组学和脂质组学逐年发表的 SCI 文章（图 2）可以看出，代谢组学发展迅猛。 图 2 | 代谢组学在“Web of Science 核心合集”逐年发表的文章统计图 检索日期：2020 年 5 月 3 日，检索关键
技术产业化研发的专业人士共同创立的新型科技企业，公司专注于向国内生命科学研究、生物技术产业研发及医学临床提供全方位现代实验技术服务 。 团队于2003年组建，立足于深厚的分子生物学背景和扎实的科研实验技术服务基础，立命于终身为祖国的科研工作者提供全方位实验技术服务，并孜孜不倦地打造出我们自己研发生产的、比国际一流品牌产品还过硬的科研产品民族品牌，为国家科学技术研究和人民身心健康事业添砖加瓦!经过几年来的不懈努力，公司已建立了涵盖分子遗传学、细胞生物学、蛋白组学、免疫学 、信号传导和神经生物
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