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  • 提供商: 威斯腾生物
    服务名称: 骨髓内皮组细胞原代培养
    骨髓内皮组细胞原代培养
    一、实验动物
         清洁级SD大鼠,雌性,3-4周,若干,购于第三军医大学动物实验中心
    二、主要仪器及试剂
    1、主要实验仪器
    80/150/200目不锈钢细胞筛 上海生工,中国
    电热压力蒸汽消毒器 浙江绍兴医疗器械总厂
    超净工作台 苏州净化设备公司
    二氧化碳培养箱 三洋(Sanyo),日本
    电热恒温鼓风干燥箱 上海跃进医疗器械厂
    低速台式离心机 上海安亭科学仪器厂
    倒置显微镜     OLYMPUS,日本
    照像系统 OLYMPUS,日本
    移液器 Eppendorf,德国
    细胞计数板 上海医用仪器厂
    细胞培养瓶及细胞培养板 Costar,美国
    各种型号塑料离心管、移液枪头和冻存管            Axygen,美国
    0.22um纤维素滤膜        MILLIPORE,美国
    0.45um混合纤维素滤膜       MILLIPORE,美国
    剪刀、镊子 中山恒基达医疗器械
    2、主要试剂
    EBM-2Kit培养基 LONZA ,瑞士
    胎牛血清 Gibco,美国
    PBS 北京中杉
    青霉素-链霉素溶液(100×) 碧云天,中国

    3、主要试剂配制
    (1)EBM-2Kit培养基:按说明书加入生长因子和血清(2%FBS)。
    (2)PBS磷酸盐缓冲液: PBS粉剂用ddH2O定容至1000 mL,调pH7.2,121℃、30min高压灭菌,4℃保存备用。

    三、 细胞操作实验方法
    (1)取SD大鼠,颈椎脱臼法处死后立即用75%乙醇浸泡,移入超净工作台内,用大头针固定大鼠四肢于工作台面的泡沫板上。(2)碘酒擦拭四肢,再用酒精棉球擦拭,无菌条件下分离出大鼠股骨和胫骨,剔除骨头表面肌肉,PBS溶液冲洗两遍。
    (3)去除骨骺端,用1mL无菌注射器吸取DMEM溶液冲洗骨髓直至骨髓腔变白,吸入离心管内,1000rpm离心5min,弃上清。用PBS重悬细胞沉淀。
    (4)缓慢将细胞悬液加入预先装有5mL淋巴细胞分离液的15mL离心管内,保持细胞悬液在淋巴细胞分离液上层,注意不要搅动液面,保持二者分层界面。
    (5)2000rpm离心20min,离心后溶液分5层,吸取中间骨髓基质细胞层(白膜层),PBS洗3次。
    (6)用含生长因子和血清(2%FBS)的EBM-2培养基以106/mL细胞浓度接种于6孔板中,置37℃、5%CO2恒温培养箱中培养,48h后取出未贴壁细胞继续培养。
    四、无菌操作注意事项
    细胞培养一定要保持工作区的无菌清洁,先用紫外灯和臭氧杀菌1h,然后通风30min,操作前需要换细胞间专用拖鞋,双手带上一次性橡胶手套并用75%乙醇消毒,穿上实验服,戴上一次性口罩和帽子,整个无菌操作都应该在酒精灯的周围进行。
    五、服务流程:


     
    【本平台合作项目】
    分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!
    【全国免费热线】:400-675-6758
    【电话】 023-65316016,023-65316556
    【邮箱】 china-western@163.com
    【官网网址】www.cqwestern.com
    【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园 D 栋 2 楼
     
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