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- 2026年08月03日
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miaolingbio
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文献和实验_0.html pcmv4载体图谱及序列：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2981669_0.html pMD 18-T载体图谱及序列：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3357926_0.html 载体pFL61图谱：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3714582_0.html 载体pCI的图谱：http://www.dxy.cn/bbs
编码区的基因片段，其由5'末端的stat密码子（ATG）和3'末端的终止密码子（TAA，TAG或TGA）结合。然后将目的基因片段插入pMD18-T载体中以构建重组质粒，通过DNA测序鉴定。用指定的酶消化重组pMD18-T质粒，并通过以下方案将检索到的目的DNA片段亚克隆到pET-32α（+）载体中以产生重组表达载体。将约129bp的TBO基因片段插入pET-32α（+）载体（5900bp）用相同的限制酶在37℃消化pET-32α（+）载体和重组pMD18-T载体1小时，然后通过在65℃温育10分钟
有利于连接酶的活性。但是在这个温度下，粘性末端的氢键结合是不稳定的。因此人们找到了一个折中的温度，即12~16℃，连接12~16h （过夜），这样既可最大限度地发挥连接酶的活性，又兼顾到短暂配对结构的稳定。 pMD18-T Vector 是一种高效克隆PCR 产物（TA Cloning）的专用载体。该载体由pUC18 载体改建而成，在pUC18 载体的多克隆位点处的XbaⅠ和SalⅠ识别位点之间插入了EcoR V识别位点，用EcoR V进行酶切反应后，再在两侧的3’端添加“T”而成
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