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上海善然生物科技有限公司
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文献和实验做过 qPCR 实验的小伙伴都知道,稳定和精确的 qPCR 实验常和 PCR 的扩增效率有关。实验中,为了确保 qPCR 实验结果的准确,建议在实验前通过标准曲线的实验评估 PCR 的扩增效率。做标准曲线实验的时候,建议将标准品进行至少 5 个数量级的梯度稀释,每个梯度稀释液进行 3 次重复,然后将稀释的标准品进行 qPCR 实验,最后根据各样品的浓度(或未知浓度样品的稀释倍数)及相应的 Ct 值绘制标准曲线(图 1)。 图 1. 扩增曲线和标准曲线 其中,slope 是标准曲线的斜率,Eff
zgq8888 求助: 我想做一个QPCR检测肝癌组织及正常组织的一个基因表达,我是用哪个做标准品建立标准曲线;另外关于人的内参NAPDH的引物序列,不同文献不同,我应该怎样选择。谢谢 zjubell 你要做绝对定量还是相对定量? 既然你提取用内参,那应该就是相对定量了 所以不需要标准品做标准曲线。但你需要对你的两对引物进行扩增效率测试 也是10倍稀释,就拿cDNA即可。 如果两个梯度间
,比如: 1.It seems there are many wrong metabolite identifications; 2.How the authors identify the isomers because are no standards described in the manuscrip; 3.Please add information of MS2 and mass error in Table; …… 2.避免审稿小技巧—数据鉴定的标准化 防患于未然,把数据鉴定标准化、明确化和数据化显得尤为重要,在文章中适当呈现,是避免一系列审稿
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