- ￥190 - 3760
- 百奥莱博
- 北京
- YT001-ZUY
- 2025年07月08日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2～8℃
- 保质期：
长期
- 英文名：
Plasmid Mini Preparation Kit
- 库存：
423
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格：
50次|200次
本试剂盒适用于常用的EndA-菌株DH5α、JM109和XL-1 blue等。对于EndA+菌株如JM110、BL21(DE3)、TG1和HB101等，可以顺利完成质粒抽提，但从EndA+菌株中抽提获得的质粒会有轻微的核酸酶污染，如果在内切酶缓冲液中37℃孵育1小时会导致质粒全部降解。从EndA+菌株中抽提质粒时推荐使用我公司的通用型质粒小量抽提试剂盒(YTB4001)、通用型质粒中量抽提试剂盒(YTB4002)和通用型质粒大量抽提试剂盒(YTB4003)。
野生型大肠杆菌中表达Endonuclease I，能切割并降解双链DNA。编码Endonuclease I的基因是endA，如果endA突变失活，其基因型会被标注为endA1，相应的突变菌株被称为EndA-菌株，而野生型菌株则被称为EndA+菌株。常见的EndA-和EndA+菌株参见附表1。从EndA+菌株中抽提的质粒，微量核酸酶和质粒结合而容易被共纯化，导致容易降解。
本试剂盒采用了一种新型的离子交换柱。在特定条件下，使质粒能在离心过柱的瞬间，结合到质粒纯化柱上，在一定条件下又能将质粒充分洗脱，从而实现质粒的快速纯化。无需酚氯仿抽提，无需酒精沉淀，12个样品只需不足30分钟即可完成。
每个质粒纯化柱可以结合的质粒量的上限约为20μg。每个纯化柱可用于抽提1～5mL用LB培养过夜的大肠杆菌。抽提所得质粒的OD260和OD280比值一般在1.80左右。抽提获得的质粒量会受质粒拷贝数等因素影响。抽提获得的质粒DNA的OD260和OD280比值也会因菌种不同等原因而略有波动。
试剂盒组成：
| 组分 | 规格 |
| 溶液I (悬浮液) | 15mL |
| 溶液II (裂解液) | 15mL |
| 溶液III (结合液) | 20mL |
| 溶液IV (洗涤液) | 18mL |
| 溶液V (洗脱液) | 3mL |
| RNase A (100mg/ml) | 15μL |
| 小抽质粒纯化柱及废液收集管 | 50套 |
| 说明书 | 1份 |
保存条件：室温保存，一年有效。
注意事项：
- 第一次使用前把试剂盒提供的RNase A全部加到溶液I (悬浮液)中，混匀，并在瓶上做好标记。加入RNase A后4℃存放。
- 第一次使用前在溶液IV (洗涤液)中加入27mL无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。
- 温度较低时，溶液II和溶液III可能会有沉淀产生。使用前必须检查一遍。如有沉淀，37℃水浴加热溶解，混匀后使用。溶液II请勿过分剧烈混匀，否则会产生大量气泡。
- 溶液II使用完后，一定要盖紧瓶盖，防止被空气中二氧化碳酸化。
- 溶液II有强碱性，溶液II、溶液III和溶液IV对人体有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。
- 本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
- 废液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。
使用说明：
- 取过夜菌1.5mL，5000g离心1分钟收集细菌沉淀，弃上清。再重复一次，每管共收集3mL过夜菌沉淀。
通常大肠杆菌宜用LB培养过夜(16小时左右)至OD值为2～4。建议5000g(通常为5000rpm左右)室温离心1分钟，如沉淀不充分则适当延长离心时间。时间过长或离心速度过快会使沉淀过于紧密，不利于加入溶液I后散开沉淀。直接倒掉上清，再倒入约1.5mL菌液并重复上述操作，然后倒置于吸水纸上(可用普通草纸)，使液体流尽。如果细菌密度明显偏低，可考虑使用更多菌液，再重复上述操作1～2次。对于高拷贝质粒所用菌量一般不能超过5mL，对于低拷贝质粒所用菌量一般不能超过10mL。过量的细菌会导致后续的裂解不充分。 - 每管加入250μL溶液I，重悬细菌沉淀。确保沉淀完全散开，无可见细菌团块。
确认溶液I中已经添加了RNase A。最高速度vortex 5～10秒或更长时间，悬起沉淀。一定要充分混匀，对着光亮处观察应呈均匀的悬浊液，无明显细菌团块或絮块。如果没有vortex，可以用枪吹打沉淀使沉淀逐渐散开或用手指把沉淀弹开。 - 每管加入250μL溶液II，轻轻颠倒离心管4～6次，使细菌完全裂解，溶液透明。
切勿vortex！vortex或其它剧烈操作会导致基因组DNA断裂，易导致最终所得质粒被基因组DNA污染。颠倒4～6次后，溶液应变得透明，无团块或絮状物。如果加入溶液I后细菌没有完全散开，那么颠倒4～6次后，可能还会有团块或絮状物。遇到有少量团块或絮状物产生的情况，可以增加颠倒次数3～5次，再室温放置2～3分钟，但总裂解时间不可超过5分钟。 - 每管加入350μL溶液III，随即颠倒离心管4～6次混匀，可见白色絮状物产生。
切勿vortex！颠倒次数也不宜过多，否则易导致最终所得质粒的质量下降。 - 最高速(13000rpm左右)室温离心10分钟。
离心后会产生白色沉淀。离心时准备好下一步需使用的质粒纯化柱，废液收集管，并在纯化柱上做好标记。 - 将上一步骤离心后的上清倒入或吸入到质粒纯化柱内。最高速离心30～60秒，倒弃收集管内液体。
质粒倒入质粒纯化柱后，可以不用等待，直接离心。倒弃收集管内的液体后，保留收集管继续使用。 - 在质粒纯化柱内加入750μL溶液IV，最高速离心30～60秒，洗去杂质，倒弃收集管内液体。
加入溶液IV后可以不用等待，直接离心。倒弃收集管内的液体后，保留收集管继续使用。 - 再最高速离心1分钟，除去残留液体并使痕量乙醇完全挥发。
注意：倒弃收集管内液体后再离心，才能彻底去除微量的溶液IV。微量的溶液IV会影响质粒的质量。 - 将质粒纯化柱置于洁净1.5mL离心管上，加入50μL溶液V至管内柱面上，放置1分钟。
溶液V需要直接加至管内柱面中央，使液体被纯化柱吸收。如果不慎将溶液V沾在管壁上，一定要震动离心管，使液体滑落到管底，以便被纯化柱吸收。也可以用重蒸水或Milli-Q级纯水替代溶液V，但是水的pH应不小于6.5。溶液V加入后放置时间稍长，对于增加质粒产量会略有帮助。如想得到较高浓度的质粒，可以加入35μL溶液V洗脱。 - 最高速离心1分钟，所得液体即为高纯度质粒。
通常所得质粒浓度为0.1～0.3mg/ml左右。如果想得到高浓度的质粒，可以采用常规的乙醇沉淀方法浓缩质粒。
附表1.EndA- and EndA+ strains of E.coli.
| EndA- | EndA+ |
| BJ5183 | BL21(DE3) |
| DH1 | CJ236 |
| DH20 | HB101 |
| DH21 | JM83 |
| DH5α | JM101 |
| JM103 | JM110 |
| JM105 | LE392 |
| JM106 | MC1061 |
| JM107 | NM522 (all NM series are EndA+) |
| JM108 | NM554 |
| JM109 | P2392 |
| MM294 | PR700 (all PR series are EndA+) |
| SK1590 | Q358 |
| SK1592 | RR1 |
| SK2267 | TB1 |
| SRB | TG1 |
| TOP10 | Y1088 (all Y10 series are EndA+) |
| XL1-Blue | BMH 71-18 |
| XLO | ES1301 |
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文献和实验包括柱离心式DNA胶回收及PCR产物快速纯化试剂盒、柱离心式质粒小量快速抽提试剂盒、柱离心式高纯质粒小量快速抽提试剂盒、 柱离心式去内毒素超纯质粒小量快速抽提试剂盒、 质粒抽提、DNA胶回收、PCR产物纯化柱离心式多用途小量纯化试剂盒、柱离心式质粒中量抽提试剂盒 、柱离心式高纯度质粒中量抽提试剂盒、 柱离心式去内毒素超纯质粒中量抽提试剂盒 、核酸纯化小柱（质粒小抽、胶回收）、核酸纯化大柱（质粒中抽、大抽）等10个产品。 现因公司产品结构调整，转让该系列试剂盒的配方、生产工艺、生产设备。包教
按一下步骤操作，连续两次均抽不出任何东西，请高手指点！ 抽提用作转染的重组质粒DNA(用5ml菌液) 所用试剂盒为Promega公司的Wizard○R Purefection Plasmid DNA Purification System，能够去除对细胞有害的细菌内毒素。具体操作步骤如下： （1） 将5ml 培养过夜的阳性菌在室温(24℃)下10000×g离心10 min。弃上清，将离心管倒置至吸水纸上去除剩余水分。 （2）加入250µl 重悬液，振荡至完全重悬。 （3）加入250µ
冷却至室温，保存于-20℃。 [实验步骤] (一)提取质粒 将3mL含Apm的LB液体培养基加入到两支试管中，分别接入含pQE-31质粒和pUC18-CAT的大肠杆菌，37℃振荡培养过夜。 以下的操作按试剂盒的说明书进行。(附试剂盒说明书) (二)质粒的琼脂糖凝胶电泳 将5mL洗脱液与3mL的DNA样品缓冲液混合，加于1.2% Agarose 做凝胶电泳分析。 附：试剂盒说明书 3S Spin Plasmid Miniprep Kit V 3．
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