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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
2~8℃
- 保质期:
长期
- 库存:
220
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
50T/100T
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销售总RNA提取试剂盒哪里卖,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
规格:50T/100T
编号:XH011
原理简介
本试剂以本公司所产总RNA提取试剂(TRIzol)为基础,结合玻璃奶核酸吸附技术,使最终提取的RNA试剂纯度更高。
注意事项
1. 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase污染。
2. 使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3. 所有离心步骤最好用低温离心机在4℃条件下离心,如果实验室没有低温离心机,也可以使用常温离心机,但所提得的RNA可能会降解严重些。
操作步骤
准备工作:使用前请先开启一瓶新的无水乙醇,倒入漂洗液中,倒满至离瓶口约0.5-1ml,盖上瓶口,摇匀。
1.样品处理:
a,植物组织:以叶片RNA提取为例。取新鲜叶片在液氮中充分研磨,随后把研磨后的粉末迅速加入到裂解液中。大约50-100mg叶片使用1ml 裂解液。
b,动物组织:以鼠肝脏RNA提取为例。取新鲜或-70℃冻存组织,大约10-30mg组织加1ml裂解液,用一次性组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
a,单层培养细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,每10cm2面积加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
c,细胞悬液:离心收集细胞。每5-10×106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液。
d,血液处理:直接取新鲜的血液,加入3倍体积红细胞裂解液,混匀后室温放置2分钟,8,000-10,000rpm 离心1分钟。彻底吸弃上清,收集白细胞沉淀。每200 ul血液收集的白细胞沉淀加入1 ml裂解液。
2.混匀,将匀浆样品在室温放置5分钟,使得核酸蛋白复合物完全分离。
3.向匀浆样品中加0.2ml氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置3-5分钟,使其自然分相。如不能旋涡混匀,可手动颠倒混匀2分钟代替。
4.2-8℃ 12,000 rpm离心10分钟。样品会分成两层,RNA主要在上层的水相中,把水相(通常为500μl)转移到新DEPC处理管中。如果上清还有沉淀,可再次离心。
5.玻璃奶摇匀。加入50ul摇匀的玻璃奶,混匀,室温放置2分钟,10000转/分钟离心1分钟,去上清;沉淀加入800ul漂洗液,振荡混匀,10000转/分钟离心1分钟,去上清,再用600ul漂洗液洗一次。去上清,再次离心2分钟,用小吸头吸去上清。
7.室温放置10分钟,加入50-100ul洗脱缓冲液混匀溶解,静置5分钟。离心,取上清为所提RNA。
8.电泳或者其他方法检测,进入下游实验。
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·HB101受体菌
编号:XH047
规格:1ml
基因型:F-,supE44,hsdS20(rB-mB-),recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-1
细胞种类
高效常用宿主菌E.coli HB101
E.coli HB101在基因重组实验起始时便十分常用。遗传性能稳定,使用十分方便,适合于各种基因重组实验。
保存:所有受体菌均为甘油保存,-70℃可长期保存,-20℃可保存一年。
·TMB单组分显色液
编号:XH083
规格:100ml/500ml
产品介绍:
TMB主要应用于酶联免疫吸附实验(ELISA),经典的方法是采用AB液分开配制,使用前再混合的方法,但我们产的单组分TMB显色液,采用独特的配方,一种组分就可以显色,并且长期存放稳定。如果客户以前没听说过或者不太相信此产品,可以在离心管中直接取100ul稀释过的酶标二抗,再加入100ul此显色液,混合后试一下。
本产品特点:
即用型:无需混合,方便快捷,减少误差
灵敏度高:不低于A.B液
稳定性好:+2-8°C保存,有效期不低于24个月;显色终止后读数稳定
背景低:底物溶液在650nm检测时检测OD值小于0.04
质量可靠:产品批间差小
外观:本试剂一般情况下为无色,有时略显浅蓝色或浅黄色
使用方法:
用适当的干净容器(用纯净水反复冲洗),倒出适量的单组分TMB显色液,待达到室温后即可使用。
加液:加完HRP结合物并温育一定时间后,洗板3-5次,每孔加TMB显色液100ul。 根据个人实验需要,在室温(15-25°C)或37°C下温育10-30分钟。
终止:加等体积的1M 盐酸或硫酸溶液终止反应,孔中反应液由蓝色变为黄色。
读数:终止反应后30分钟内在450nm处读数。
注意:如果出现高的反应背景或沉淀,表明TMB底物反应过于强烈。为了避免产生沉淀,可在终止后马上读数;或者进一步稀释一抗和/或HRP结合物。
总RNA提取试剂盒哪里卖关键词:总RNA提取试剂盒,XH011,百奥莱博
·载体两性电解质ph3-9.5
编号:XH073
规格:12ml
别名:两性电解质两性电解质载体(ph3-9.5):Ampholyte solution、Ampholine。
性状;近无色至浅黄色透明液体,有粘性,为一中相对分子质量300-1000的人工合成的多氨基多羧酸系列两性化合物的复杂混合物。
溶度:为40%的溶液
用途:用于生物大分子蛋白质和酶的等电聚焦电泳
储存:充氮密封4℃保存。保持期,两年。开启后请尽快用完。
·载体两性电解质PH3.5-5.5
编号:XH074
规格:12ml
别名:两性电解质两性电解质载体(PH3.5-5.5):Ampholyte solution、Ampholine。
性状;近无色至浅黄色透明液体,有粘性,为一中相对分子质量300-1000的人工合成的多氨基多羧酸系列两性化合物的复杂混合物。
溶度:为40%的溶液
用途:用于生物大分子蛋白质和酶的等电聚焦电泳
储存:充氮密封4℃保存。保持期,两年。开启后请尽快用完。
·pUC18
编号:XH029
规格:5ug(0.1 OD)
浓度
250~1,000μg/ml
贮存溶液
Tris-HCl (pH 8.0) 10 mM
EDTA 1mM
产品说明
pUC18载体适合于DNA片段的克隆、进行DNA测序、对外源基因进行表达等。由于在lacZ领域中含有多克隆位点,因此在以lacZ缺欠细胞作为宿主 (如:JM109等) 进行转化后,在含有IPTG、X-Gal 的平板培养基上进行培养时,可以很容易地通过兰白筛选,判断载体中有无DNA片段的插入。同时还可以通过载体上的lac promoter表达外源基因,对插入载体中的DNA片段进行测序等。进行DNA测序时,可以方便地使用M13系列的通用引物。
■ 链长
2,686 bp
■ 用途
1. DNA片段的克隆。
2. 利用lac promoter进行基因表达。
3. 使用M13系列引物进行DNA测序。
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·JM109受体菌
编号:XH046
规格:1ml
基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,e14-(mcrA-),supE44,relA1,△(lac-proAB)/F’ [traD36,proAB+,lac Iq,lacZ△M15]
细胞种类
α-互补性选择宿主 E.coli JM109
E.coli JM109在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 Phage载体进行转染时,由载体DNA产生的LacZα多肽和由JM109 F’编码的lacZ△M15产生的ω Fragment结合,表现出β-半乳糖苷酶活性(α-互补性)。利用这一特性,可以很容易鉴别重组体菌株。携带有F’质粒的E.coli Competent Cells JM109,除可用于制作基因文库、进行亚克隆等之外,也可作为M13 phage载体DNA的宿主菌,制备单链DNA。
保存:所有受体菌均为甘油保存,-70℃可长期保存,-20℃可保存一年。
·羊抗人IgG(纯化抗体)
编号:XH095
规格:1mg/10mg
先以A蛋白从正常人血清中纯化免疫球蛋白人IgG,用此人IgG免疫山羊,经过多次免疫后,测得山羊血清的效价达到要求后,动脉一次取血,静置得到血清,血清采用DEAE离子交换吸掉杂蛋白,再用硫酸铵沉淀,透析,定量等进一步处理得到纯化羊抗人IgG抗体,此纯化抗体可以用于标记,免疫沉淀,ELISA等常规免疫学实验。
如果客户对抗体纯度要求更高,本公司可以定做免疫亲和纯化的抗体,以人IgG结合在树脂上,吸附全部有活性的抗体,这样得到的抗体纯度更高,当然,成本也更高。
·SABC(兔IgG)-FITC免疫组化试剂盒
编号:XH113
规格:100T
试剂盒组成:
1, 封闭液:10ml,5%BSA
2, 生物素化羊抗兔:浓缩液100ul。
3, SABC-FITC:浓缩液100ul。
4, 稀释液:30ml。
5, 抗荧光衰减封片剂
试剂盒简介:
本试剂盒适合于一抗为兔IgG的免疫组化实验. FITC显色。
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex。SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。
自备试剂:
1.粘片剂多聚赖氨酸。
2. 0.01 M PBS(pH7.2-7.4)
3. 0.01M柠檬酸钠缓冲液
4、抗荧光衰减封片剂
实验步骤:
以石蜡切片热修复为例
1. 切片常规脱蜡至水。
2.热修复抗原:将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10分钟后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。
3.滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 不洗。
4.用稀释液将一抗(如兔抗IL-10)按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗,37 ℃ 1小时左右或20℃时2小时左右。也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗2分钟×3次。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)
5.根据使用量,用稀释液将生物素化羊抗兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul生物素化羊抗兔IgG浓缩液,混匀即成工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加生物素化羊抗兔IgG工作液,20-37℃ 30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗2分钟×3次。
6.根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液,混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃,30分钟(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗5分钟×4次。
7.滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。
注意事项:如果染色背景过高,在SABC反应之后,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后封片观察。
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文献和实验实测植物总RNA提取液套装提取土豆、桑叶中的RNA 一直以来,搞植物研究的同学们对Trizol试剂提取植物RNA诟病不断,在这样的背景和需求下,我们特别研发了植物总RNA提取液套装,套装中除了植物总RNA提取液外,还包括了Buffer EX(氯仿替代品),RNA沉淀液(异丙醇替代品)以及β-巯基乙醇。真可谓一个套装在手,提取植物RNA无烦恼!现在我们特别选择了土豆块茎(Trizol试剂提取失败)和桑叶(Trizol试剂提取效率极低)两个典型样本实测植物总RNA提取液套装的效果。 实验目的
在收集到生物材料之后,最好能即刻进行RNA 制备工作。若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA 时,将储存于冷冻柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻,以避免RNase 的作用。 1. 提取组织RNA 时,每50~100mg 组织用1ml Trizol 试剂对组织进行裂解;提取细胞RNA 时,先离心沉淀细胞,每5-10 �106 个细胞加1ml Trizol 后,反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞; 2. 将上述组织或细胞
问:请问大家提取酵母的总RNA都用什么方法?有好用的试剂盒吗?酵母总RNA提取应该注意什么?答:使用热酚法抽提酵母RNA,很好用,至今没有失败过。(1) 将酵母细胞培养在3ml选择性培养基中,30℃过夜旋转培养。(2) 稀释过夜培养的菌液,重新在10ml培养基中培养细胞。(3) OD600达到1.0时,收菌,4000rpm/min离心5min,弃培养基。(4) 将细胞悬浮于400μl AE缓冲液(50mM Sodium Acetate,10mM EDTA 调整pH值至5.2
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