
蛋白质非标记定量技术(label-free)
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- 2025年07月15日
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蛋白质非标记定量技术(label-free)
- 提供商:
BPRC
蛋白质非标记定量技术(label-free)是通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析,无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准,只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据,比较不同样品中相应肽段的信号强度,从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。
实验步骤包括 样品制备→蛋白质定量和SDS-PAGE测试→酶解→三次平行的质谱分析→软件分析→定性定量的蛋白质组学结果→生物信息学数据挖掘和统计分析。
特点:
对液相色谱串联质谱的稳定性和重复性要求较高
无需昂贵的同位素标签做内部标准,实验耗费低
对样本的操作也最少,从而使其最接近原始状态,并且不受样品条件的限制,克服了标记定量技术在对多个样本进行定量方面的缺陷。
Label-free方案蛋白质不需要进行标记,所需要的样品总量较iTRAQ和TMT方案少。该技术主要用于两组样品之间的差异蛋白筛选。
样品要求:
蛋白质提取物:浓度 >1μg/μl,蛋白质总量 >200μg;
细胞样品:细胞量>107
组织样品:动物、微生物组织湿重>10mg;植物鲜嫩组织>100mg
体液样品:血液体积>500μl
实验步骤包括 样品制备→蛋白质定量和SDS-PAGE测试→酶解→三次平行的质谱分析→软件分析→定性定量的蛋白质组学结果→生物信息学数据挖掘和统计分析。
特点:
对液相色谱串联质谱的稳定性和重复性要求较高
无需昂贵的同位素标签做内部标准,实验耗费低
对样本的操作也最少,从而使其最接近原始状态,并且不受样品条件的限制,克服了标记定量技术在对多个样本进行定量方面的缺陷。
Label-free方案蛋白质不需要进行标记,所需要的样品总量较iTRAQ和TMT方案少。该技术主要用于两组样品之间的差异蛋白筛选。
样品要求:
蛋白质提取物:浓度 >1μg/μl,蛋白质总量 >200μg;
细胞样品:细胞量>107
组织样品:动物、微生物组织湿重>10mg;植物鲜嫩组织>100mg
体液样品:血液体积>500μl
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