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串联亲和纯化/质谱(Tande
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串联亲和纯化/质谱(TAP-MS)
辉骏生物
具体价格请联系辉骏生物:4006991663
串联亲和纯化质谱TAP-MS技术原理
过表达TST-Flag双标签融合蛋白的细胞,经裂解后先与Streptactin珠子孵育、初次洗涤及洗脱,释放出蛋白复合物;再将此蛋白复合物与anti-Flag珠子结合、再次洗涤,最后的洗脱产物用质谱鉴定未知的互作蛋白。
串联亲和纯化质谱TAP-MS实验流程
串联亲和纯化质谱TAP-MS技术应用
筛选内源性的和诱饵蛋白互作的蛋白
几种蛋白互作技术特点
1. GST pulldown:体外表达诱饵蛋白,简单易行,适合无IP级别抗体、又不易转基因的情况;
2. AP-MS:体内表达带标签的诱饵蛋白,洗脱产物无抗体污染,适合无IP级别抗体、但易转基因的情况;
3. TAP-MS:体内表达带双标签的诱饵蛋白,两次纯化,非特异结合蛋白更少,适合无IP级别抗体、但易转基因的情况;
4. CoIP:基本是天然蛋白复合物分离,能比较好的反应体内真实的蛋白互作情况,适合于有非常好的IP级别抗体的情况;
5. SILAC-IP:可定量鉴定分析体内蛋白复合物,适合于可传代细胞,尤其是易转基因细胞。
串联亲和纯化质谱TAP-MS服务*辉骏优势
1. 近十年服务经验,服务客户众多;
2. 对蛋白互作的筛选鉴定理解深刻,擅长针对客户具体情况提出合适的方案建议;
3. 自有分子及细胞生物实验平台,能有效制定并执行优质的实验路线;
4. 自有蛋白质组学平台,对微量TAP实验产物的质谱鉴定有十足的把控能力,对后续的生物信息分析有独到的见解;
5. 售后技术支持将一直保持到客户发表文章,确保客户安心免疫共沉淀下游实验及投稿。
串联亲和纯化质谱TAP-MS服务信息
项目名称
客户提供
结果交付
实验周期
TAP MS
细胞样本 诱饵蛋白编码区基因模板 实验信息表
1、诱饵蛋白的双标签慢病毒表达载体 2、诱饵蛋白WB检测图 3、质谱检测结果 4、生物信息学分析结果 5、实验报告
14-16周
串联亲和纯化质谱TAP-MS实验-辉骏生物客户文献
1. Reinaldo F.M. et al: Destabilizing NEK2 overcomes resistance to proteasome inhibition in multiple myeloma. The Journal of Clinical Investigation.2020 , IF=11.864.
【研究内容】:每个骨髓瘤患者都有多个亚克隆,具有高或低染色体不稳定性(CIN)特征的多个亚克隆共存会导致异质性和耐药性,导致疾病复发。作者通过串联亲和纯化质谱(TAP-MS)技术,发现了CIN基因NEK2与脱泛素酶USP7结合。该结合阻止了NEK2泛素化并使其稳定。研究发现,使用NEK2或USP7抑制剂进行靶向治疗可能是骨髓瘤最有效的辅助治疗方法。
使用技术:串联亲和纯化质谱(TAP-MS)
【研究内容】:转录因子(TF)是细胞信号通路的靶标和执行者。在这项研究中,作者对56个TF的可溶性和染色相关复合物进行了蛋白质组学分析,利用串联亲和纯化和质谱(TAP/MS)技术进行纯化,并鉴定其中的蛋白质-蛋白质相互作用。研究为大量的TF提供了有价值的蛋白质-蛋白质相互作用网络资源,强调了TF形成不同位置特异性的蛋白质复合物的一般原理,这些复合物与TF的不同调控和不同功能有关。
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