鼠抗人层粘连蛋白，HRP标记

液体、无菌，溶于0.01mol/L磷酸盐缓冲液中，PH7.4、含0.14mol/L氯化钠及50%甘油。
本品为辣根过氧化物酶（HRP）标记的鼠抗-人层粘连蛋白 单克隆抗体。该特异性针对于层粘连蛋白的抗原位点，与人血清其他成分无任何交叉反应。可用于ELISA、IHC、 Blot等科学研究实验。
本品使用或存放时须避开强光源， -２０℃存放。不含任何添加剂或防腐剂，使用时注意避免交叉污染。

实验试剂

1. 0.1M NaIO₄：称取241mg高碘酸钠溶于蒸馏水10ml中。

2. 1mM PH4.4醋酸钠缓冲液：0.2M NaAc (1.361克/50ml) 3.7ml；0.2M HAc (0.601ml/50ml) 6.3ml；加蒸馏水至2,000ml。

3. 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液：Na₂CO₃ 0.32g；NaHCO₃ 0.586g；加蒸馏水至50ml，再用蒸馏水作20倍稀释，即成0.01M PH9.5的碳酸盐缓冲液。

4. NaBH₄溶液(4mg/ml)：临用时称取NaBH₄ 4mg溶于1ml蒸馏水中。

5. 其它的试剂及器材可参见戊二醛标记法。

实验步骤

1. 称取5mgHRP溶解于1ml蒸馏水中。

2. 于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO₄溶液，室温下避光搅拌20分钟。

3. 将上述溶液装入透析袋中，对1mM PH4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜。

4. 加20μl 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化桯RP的PH升高到9.0-9.5，然后立即加入10mg IgG(抗体，或SPA 5mg)在1ml 0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时。

5. 加0.1ml新配的4mg/ml NaBH₄液，混匀，再置4℃ 2小时。

6. 将上述液装入透析袋中，对0.15M PH7.4 PBS透析，4℃过夜。

7. 在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃ 1小时。

8. 3000rpm离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次，最后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。

9. 将上述溶液装入透析袋中，对0.15M PH7.4的PBS缓冲盐水透析，去除铵离子后(用萘氏试剂检测)，10,000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物，分装后，冰冻保存。

10. 结果判定

除标记物IgG量的计算，略有不同以外，其余均同戊二醛法。

IgG量(mg/ml)＝(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62