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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
冷藏
- 保质期:
长期
- 库存:
296
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
25ml/100ml/250ml
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应ECL超敏发光液,我公司销售全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
规格:25ml/100ml/250ml
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
编号:XH057
保存条件:2-8度保存有效期12个月
产品简介
ECL化学发光液在HRP的催化下发生化学反应而发光,可用于检测固定在膜上的蛋白质等生物大分子。使用照相技术(X-光胶片曝光)或者其他成像方法(如荧光或化学发光成像仪)进行检测。
我们的ECL超敏发光液是在普通的化学发光液基础之让改进而来,相对于普通发光液来说,灵敏度更高,检测下限更低,可达到pg级别的抗原,并且一抗和二抗的稀释度更高。
本产品在5分钟后光强达到最大,在30分钟时光强还能维持80%(以5分钟时光强为基础)。最终发光时长可达一小时。
操作步骤
1.在二抗孵育完毕后,将发光液从冰箱取出到室温平衡。将印迹膜充分洗涤。
2.根据需要量,将ECL超敏发光液A和ECL超敏发光液B按照1:1的比例等体积混合,配制为化学发光检测底物工作液(例如:一张8cm×6cm的膜使用2ml工作液,为节省试剂,初次实验可用洗涤缓冲液测试,以最少的液体盖住整个膜的表面)。
3.弃去洗涤缓冲液,转移到暗室或者避光盒里操作,将发光底物工作液滴加在印迹膜上,确保工作液覆盖整张膜,室温孵育5分钟。
4.去掉多余发光底物工作液,将印迹膜置于两层干净的塑料薄膜之间,此过程应小心完成,避免膜与膜之间产生气泡。
5.在暗室内进行X-光胶片曝光,或将膜放置到荧光、化学发光成像仪内,按照仪器说明书进行检测。
6.因本产品发光发光超度高,发光时间长,所以为得到理想的结果,可多次曝光(不同时长)以得到理想的结果。
注意事项
1.为获得最佳实验结果,请务必优化实验条件,包括检测样品的用量、一抗、二抗稀释度、杂交膜及封闭试剂的选择,并且发光液请现用现配。
2.建议在封闭缓冲液及所有抗体稀释液中加入高质量的吐温-20(终浓度为0.05%),以减少非特异性结合。
3.由于叠氮钠是HRP抑制剂,在缓冲液中应避免使用叠氮钠作为防腐剂。
4.免疫印迹实验进行全过程中,请确保印迹膜始终处于湿润状态,避免干燥。
5.在与膜发生接触过程中请佩戴手套或者使用洁净镊子,避免蛋白污染。
6.实验过程中,请使用洁净器材。保证非金属设备没有明显划痕,金属设备表面无锈。锈可能导致膜上带有污点或者高背景。
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·SYBR Green I(20×)定量PCR用
编号:XH027
规格:1ml
SYBR Green I与dsDNA 结合荧光信号可增强800—1000倍。在PCR反应体系中,加入过量SYBR Green I荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,荧光信号增强,而不掺入链中的SYBR Green I染料分子荧光不变,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。荧光可以在退火阶段或者延伸阶段测定。
使用浓度对荧光PCR结果的影响
SYBR Green I荧光定量PCR的试验成功有很多因素,但是SYBR Green I的使用浓度是非常关键的因素,如果SYBR Green I的浓度过低会使荧光信号的变化降低。这就意味着低拷贝的样品可能无法检出;而在高浓度时,将会抑制PCR反应。降低PCR反应效率。所以一般在使用SYBR Green I时应根据实际情况优化使用浓度。
我们提供的为20×的浓缩液,使用时可稀释20—100倍,即使反应的终浓度为1×到0.2×之间。
镁离子浓度的影响
提高镁离子浓度可以降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用。我们建议在用SYBR Green I进行荧光PCR反应时,镁离子浓度要比无SYBR Green I 的普通 PCR 反应要高出 0.5 到3mM。
北京百莱博科技有限公司专业生产供应销售生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒,更多试剂产品需求,欢迎来电咨询选购。
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文献和实验过夜具体多长时间算合适,其实没有硬性规定; 二抗孵育的时间不宜过长,一般是室温下摇床孵育 1~2 小时,抗体孵育完成后要清洗干净,特别是二抗孵育完成后,否则可能导致显影结果出现高背景。 6、发光液配置 大部分实验室使用的 ECL 发光液,A 液和 B 液按照 1:1 的比例配置; 发光液要求现用现配,每次根据使用量合理配置用液量; 发光液配置时间过长同样会引起发光效果不好,背景脏或者漆黑一片。
tyoutei 我做wb,ECL发光的时候,在发光液里能看到清楚的条带,但每次拿出条带准备压片的时候,条带就消失了,怎么都压不出来,请问是什么问题呢? bianbenjamin 二抗浓度过大,迅速淬灭了 tyoutei bianbenjamin wrote: 二抗浓度过大,迅速淬灭了 谢谢!问题已经解决了,不过是提高了抗原
【求助】求助:Western blotting曝光没有任何条带,也没有背景,为什么?
文竹竹 我最近做western blotting很郁闷。上周用压片盒压片曝光结果还可以,条带很清楚,可是昨天在同样条件下做的结果,什么条带都没有,是白板。为什么?请高手给予帮助!谢谢!二抗?ECL液? liruonan728 二抗出问题?1、二抗本身失活 2、二抗被灭活 想一想操作过程有无上述失误 liruonan728 二抗出问题?1、二抗本身失活
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