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美国GENMED主要运用世界上最尖端的基因综合技术平台(数字化染色体基因型完全分析技术、表观基因组完全分析技术、染色体单体分离分析技术、基因靶标技术、全基因表达完全分析技术、RNA拼接图谱综合分析技术、SiRNA完整表达文库构建技术、细胞抗原谱学技术、胶体金层析法金标技术、蛋白激酶组学完全分析技术、蛋白表位标记技术、Seldi蛋白质谱分析技术、高容量细胞荧光筛选技术、高通量远红外细胞免疫筛选技术),从事疾病指纹诊断系统、农作物种子改造和分子操作、生物反应器、中草药和海洋生物抗肿瘤活性物质筛选、基因检测中心、技术平台服务和培训等独步天下的杰美产品和服务体系的开发,以期成为基因医学产业化的领军企业。
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文献和实验【求助】土壤微生物总DNA的提取及细菌16S rDNA的PCR扩增出问题了,寻求大家的帮助!
tyuanc 我用MO Bio的soil DNA Isolation Kit提取土壤总DNA,提取的DNA直接跑胶,看不见任何条带,采用细菌16S rDNA通用引物(27F和1492R)进行PCR扩增,也没有结果,有一次我将试剂盒提取的DNA50倍稀释后,进行细菌16S rDNA的PCR扩增,扩增出了目的条带,我所用的酶为Takara的LA Taq,用普通的Taq酶扩增不出来,但隔了一周后再去重复,什么条件都一样,却再也扩不出来了,我重新提取了新的DNA进行
臂区域如果 GC 含量过高过低,或者有重复序列,都可能在核酸外切酶切割后形成发卡结构,影响重组效率,可以使用质粒设计软件来检查同源重组臂的设计。 ⑤插入序列本身的问题:有些序列本身存在连接载体困难、连接产物不稳定、连接产物在大肠杆菌中复制困难等问题。对于这类序列可以考虑将序列打断后分步构建,或者更换载体或感受态的方式尝试解决。 2. 质粒提取量不足 质粒提取量少常见的原因可能是: ①摇菌时间过长:大肠杆菌生长已经超过对数期,细菌老化,导致细胞和 DNA 降解。 ②摇菌时间不足:细菌生长不充分
,如Buffer PBS等,把微生物从土壤中分离出来,然后再进行DNA的提取。间接法可大大降低土壤中腐殖酸,重金属盐对DNA提取带来的影响,但是这种方法会丢失许多微生物,得到的DNA并非土壤样品中的全基因组(宏基因组),间接法使用的已经很少了。 目前市面上对于去除腐殖质工艺做的最好的试剂盒,就是MPbio公司的土壤DNA提取试剂盒,该试剂盒能够有效去除土壤样本中的腐殖质,极大提高目标DNA的提取浓度,很多土壤相关工作人员都选用该试剂盒。不过优秀的产品也会有短板,MP试剂盒在有效去除腐殖质的过程中难免
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