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    首页 / 试剂 / 生物化学 / 活性氧(ROS)检测试剂盒-40μl
    活性氧(ROS)检测试剂盒-2ml
    文献支持

    活性氧(ROS)检测试剂盒-4

    0μl
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    价格: 询价
    品牌: 万类生物 已认证
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    距离结束
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    试用份额:
    5
    试用说明:
    1、试用品规格:40μl
    2、运费: 不包邮 ;申请者需自行承担运费
    3、联系时间: 试用活动结束后的3天内
    4、申请要求: 每人限申请1个
    5、其他说明: 辽宁省(大连除外)区域暂停试剂试用装申请
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      • 免费申请,无需支付其他费用;
      • 申请时请注意查看邮费信息和试用说明等商家说明,避免不必要的损失;
      • 试用名单在活动结束后 1 个工作内通过短信、邮箱、公众号等通知;
      • 试用活动结束后,7 天内商家主动联系发货;
      • 试用结束后,请及时提交试用报告;
      • 未提交报告,将降低申请成功几率。
      • 保存条件:

        -20℃,避光

      • 规格:

        40μl

        丁香通试用规则:(试用活动期限:2024.5.13-2024.6.21)
        1. 运费:申请者需自行承担运费
        2. 发货时间:试用结束经电话确认后统一发放试用装
        3. 申请要求:每人限申请1个
        4. 其他说明:辽宁省(大连除外)区域暂停试剂试用装申请

         

        产品名称:活性氧(ROS)检测试剂盒-40μl

        产品概述:
        活性氧检测试剂盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit)是一种利用探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光 , 可以自由穿过细胞膜 , 进入细胞内后 , 可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成强绿色荧光物DCF激发波长488nm,发射波长525nm附近有最大波峰,强度与细胞内活性氧水平成正比。
        本试剂盒本底低,灵敏度高,线性范围宽,使用方便;可以测定100-500个样品。 的荧光光谱与FITC特别相似,流式检测时,可以用FITC的参数设置检测DCF。


        保存条件
        -20°,避光
         
        注意事项
        1. 探针装载后 , 一定要洗净残余的未进入细胞内的探针 , 否则会导致背景较高。
        2. 尽量缩短探针装载后测定所用的时间(刺激时间除外),以减少各种可能的误差。
        3. 整个实验应该避光操作。

        该产品被引用5分+文献(仅展示部分):

        1、 Li B; Huo S; Du J, et al., Dibutyl phthalate causes heart damage by disrupting Ca(2+) transfer from endoplasmic reticulum to mitochondria and triggering sub sequent pyroptosis. Sci Total Environ 2023, 892, 164620.
        IF: 10.753 Year: 2023 PMID: 37270010
        2、 Li B; Zhang X; Huo S, et al., Aluminum activates NLRP3 inflammasome-mediated pyroptosis via reactive oxygen species to induce liver injury in mice. Chemico-Biological Interactions 2022, 110229.
        IF: 5.1 Year: 2022 PMID: 36354081
        3、Kang Y; Zhu R; Li S, et al., Erythropoietin inhibits ferroptosis and ameliorates neurological function after spinal cord injury. Neural Regen Res 2023, 18 (4), 881-888.
        IF: 6.058 Year: 2022 PMID: 36204858
        4、 Kang Y; Li Q; Zhu R, et al., Identification of Ferroptotic Genes in Spinal Cord Injury at Different Time Points: Bioinformatics and Experimental Validation. Mol Neurobiol 2022.
        IF: 5.682 Year: 2022 PMID: 35796899
        5、 Liu H; Gui X; Chen S, et al., Structural Variability of Lipoarabinomannan Modulates Innate Immune Responses within Infected Alveolar Epithelial Cells. Cells 2022, 11 (3).
        IF: 6.6 Year: 2022 PMID: 35159170


        操作流程:
        1. 装载探针
        对于药物处理时间较短(<2h)的细胞或预计ROS效应较弱,可先或同时装载DCFH-DA探针。反之,对于细胞药物处理时间较长(>6h)的细胞或预计产生ROS效应较强 , 可后装载探针DCFH-DA。
        ①在暗室中加入 DCFH-DA 于无血清培养液,推荐初始工作浓度为2µM对不同的细胞或处理,DCFH-DA 工作浓度可为 2µM-10µM,需要进行预实验确定合适的浓度,总体稀释倍数应在1:100-1:500以上,避免DMSO对细胞的影响。
        ②37℃孵育细胞20min-30min。
        2. 细胞收集
        悬浮细胞:细胞收集后重悬于稀释好的DCFH-DA中,细胞密度为105-106个/ml,37℃细胞培养箱内孵育20min。每隔3-5min颠倒混匀一下,使探针和细胞充分接触。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。300g离心5min(1500 rpm/min),用PBS洗涤1-2次。
        贴壁细胞:去除细胞培养液,加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜,通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的DCFH-DA不少于1ml。37℃细胞培养箱内孵育20min。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。用胰酶消化细胞(0.25%胰酶),加入完全培养基终止消化,制成细胞悬液。300g离心5min(1500rpm/min),用PBS洗涤1-2次。
        3. 组织样本
        ①选取的组织立即放入预冷的组织培养液或PBS中,清洗血迹及污染物。去除组织块中的坏死成分、纤维、脂肪及血管。 
        ②用眼科剪将组织块剪成1 mm³左右小块,放在预冷的组织培养液或PBS中并进行漂洗,洗去剪碎的细胞碎片。
        ③将300目尼龙网扎在烧杯上,将剪碎的组织放在网上,以眼科镊或刮刀轻搓组织块,边搓边以PBS冲洗,直至将组织搓完。 
        ④收集细胞悬液,500 g离心10 min去上清,并用PBS洗1-2次,并重悬制备单细胞悬液,细胞计数总数不少于106个细胞。
        说明:仅在阳性对照孔中加入TBHP作为阳性对照,其余孔不必加入TBHP。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30min后可以显著提高活性氧水平。 
        4. 检测
        ①对于原位装载探针的细胞样本可以用荧光显微镜直接观察拍照。
        ②收集细胞后可以用荧光酶标仪检测。
        ③收集细胞后也可以用流式细胞仪检测。
        备注:
        (1)阳性对照可以按照1:200-1:500的比例使用。例如装载好探针的细胞共1ml,可以加入2μl-5μl的阳性对照刺激。通常刺激后20-30分钟内可以观察到非常显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞,活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30min内观察不到活性氧的升高,可以适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果活性氧升高得过快,可以适当降低活性氧阳性对照的浓度。
        ①对于原位装载探针的细胞样本可以用荧光显微镜直接观察拍照。
        ②收集细胞后可以用荧光酶标仪检测。
        ③收集细胞后也可以用流式细胞仪检测。
        (2)对于某些细胞,如果发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强,可以按照更大比例稀释DCFH-DA。
        探针装载的时间也可以根据情况在15-60min内适当进行调整。
        (3)活性氧阳性对照仅用于作为阳性对照的样品,并不是在每个样品中都需加入活性氧阳性对照。

        产品图片:

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      温馨提示:不可用于临床治疗。

      风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。

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