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见说明书
- 英文名:
WB second antibody Dilution
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大量供应
- 规格:
50T/635T
WB封闭液(BSA)技术问答
问:组织样本是怎么收集的?
答:样本的采集,取组织块,(一般需要0.2g以上)在冰冷的生理盐水中漂洗,除去血液,滤纸吸干,准确称重,放入冻存管或离心管中-20度可以保存3个月,-80度可以保存半年。
问:在做ELISA时,配套96孔板被用完了,可以用其它的96孔板代替吗?稀释标准品的时候是怎么稀释的?。通过什么来确定这组数据可用或不可以用?
答:ELISA配套的酶标板上是包配抗体的,所有用完了就没有了,不可以用其它的96孔板代替,稀释标准品的时候您可以倍比稀释,取5根管子,里面各加120ul的标准品稀释液,然后从第5根管子开始,加120ul的标准品,混匀,从以稀释好的第5根管子里吸120ul到第4根管子里,这样一直到第一根管子。我们是根据您做的标准曲线成不成线性来判断这组数据可以用还是不可以用的。
问:做淀粉酶(AMS)实验时,测定管和空白管吸光度的差值一般控制在什么范围内就被认为值可以用?
答:一般的我们在做AMS时,测定管和空白管的吸光度OD值差值控制在0.05-0.150之间。被确定为可以用。
问:总抗氧化能力,能用酶标仪测吗?
答:不可以,总抗氧化能力容易浑浊,对光径也有要求,也没有标准品。
问:做got/gpt时标曲线一定要做吗?
答:我们说明书上的标准曲线,是给老师你做参考用的,不同的仪器做的标曲都不一样,所以为了您实验的准确性必须得做
问:测组织时为什么还要加测蛋白浓度?测血清时为什么不加测蛋白浓度?
答:因为测组织时要先匀浆,匀浆的程度不一样释放出的蛋白也不一样,我们测蛋白就是为了校正匀浆破碎的程度,而测血清时是不需要匀浆的所以不用加测蛋白浓度。
问:NO试剂盒测房水中NO可以吗?
答:如果可以,那标本取材有要求吗,比如:取的量50微升左右可以吗?保存条件?根据您们的经验是取一次做一次,还是可以全取完再一起做?
2、关于实验时的波长:必须是550还是可以有一个波动范围呢?
3、有些文献提到用硝酸还原酶法后在用“荧光计数法”计算,有必要吗?
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文献和实验它们都是BSA A、请问各位高手,在进行免疫荧光的实验时,浸一抗之前,要用的封闭液中1%的BSA是怎么配制? 封闭液封闭后还用PBS 清洗干净再浸一抗吗? 1.可以直接用0.02M的PBS 配制 2.不用PBS 清洗干净,直接浸一抗。 B、各位高手,间接法中我想摸索封闭液BSA的最佳浓度,用抗原 包被后,用不同浓度的BSA(0.5%,1%,2%,3%)封闭,其他条件固定,测得 OD450nm后,可以看出随着BSA浓度
奶粉封闭,就会背景脏得不得了。还有一点就是脱脂奶粉的 IgG 能和抗山羊的二抗有交叉反应……所以……第二种封闭液就是 BSA,这个相对来说贵一些,一般会用于一些磷酸化的 WB 里。但是,有些 BSA 偶联的多肽要做 WB 的话,就绝对不能用 BSA 作为封闭液。第三种封闭液估计你们不会特别常用,其实就是吉利丁,做过布丁或者慕斯蛋糕的同学可能知道这是啥。其实就是 Fish Gelatin,鱼明胶,但是这种封闭液成分价钱很傲娇,所以平时没什么人会使用这个。还有一种比较常用的封闭液,就是 0.25 - 2%
① 膜封闭时间不够,室温下通常摇床孵育膜 1h,出现这种情况可以更换合适的封闭液或者适当延长封闭的时间; ② 抗原抗体免疫过程中一抗稀释度太高,可以多设置几组一抗浓度,摸索最适宜的抗体稀释度; ③ 在整个实验过程中膜发生干燥或手套反复接触过也会发生背景值高的情况,因此实验过程中要注意保持膜的湿润,使用镊子夹取膜。 3、WB 结果中有杂带干扰 ① 抗体纯度不高会产生非特异性条带影响结果,高纯度抗体条带特异性更好,建议更换抗体; ② 一抗浓度过高,降低一抗稀释比,目的条带和杂带可能会减弱
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