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- Thermo scientific -fermentas
- ER0621
- 2025年10月05日
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X Buffer R | 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER0621 | 300 u (10 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER0621 | |
| ER0622 | 1500 u (10 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER0622 | |
| ER0627 | 100 u (10 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ||
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
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| R | 37°C | 0-20 | 20-50 | 50-100 | 100 | 50-100 | 100 | 1X or 2X |
Lambda DNA
0.7%琼脂糖
3 切割位点
10 mM Tris-HCl (pH 8.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 100 mM KCl, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 300 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 完全重叠 – 阻止酶切。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 无重叠 – 不影响。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| Dam (GATC) | CGm6ATC G |
不阻止酶切 |
| CpG | CGATCG |
阻止酶切 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 20-50 | 50-100 | |||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 3 | 0 | 1 | 1 | 2 | 2 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 0 |
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文献和实验性，在胡萝卜II型转化酶基因启动子的克隆方面取得了新的进展。首先将胡萝卜基因组DNA 分别用PvuI、SmaI、DraI、EcoRV酶切，并设计了1个衔接头长链序列和1个衔接头短链序列，并在衔接头短链的3'末端带有1个氨基的衔接头，能够阻止聚合酶催化的衔接头短链的延伸，同时衔接头的长链和短链之间是反向重复序列。将酶切片段与此衔接头连接，取连接产物做模板，以衔接头引物和基因特异引物做PCR ，在首轮PCR 中只有限定的远端基因特异引物有结合位点，当基因特异引物延伸产生的DNA 链通过衔接头时，才能产生衔
GR/CGYC PsrI GAA***NNNNTA/C BsgI GTGCAG,16,14 PvuI CGAT/CG BsiEI CGRY/CG RleAI CCCACA,12,9 BsiWI C/GTACG RsrII CG/GWCCG BsmBI C/GTCTC SacII CCGC/GG BsrBI CCGCTC,-3,-3 SalI G/TCGAC BsrFI R/CCGGY SanDI GG/GWCCC BsrGI T/GTACA SapI G/CTCTTC BssHII
， PvuI ， SacI ， SacII ， SalI ， ScaI ， SmaI ， SpeI ， SphI ， StuI ， XbaI ， XhoI ， XmaI ，为什么要添加保护碱基？在分子克隆实验中，有时我们会在待扩增的目的基因片段两端加上特定的酶切位点，用于后续的酶切和连接反应。由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性核酸内切酶切开，因此在设计 PCR 引物时，人为的在酶切位点序列的 5‘ 端外侧添加额外的碱基序列，即保护
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