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- Thermo scientific -fermentas
- ER0611
- 2025年10月04日
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大量
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X Buffer O | 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER0611 | 3000 u (10 u/µl) | 2 x 1.00 ml | 1.00 ml | ER0611 | |
| ER0612 | 5 x 3000 u (10 u/µl) | 2 x 1.00 ml | 1.00 ml | ER0612 | |
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| O | 37°C | 50-100 | 50-100 | 100 | 100 | 50-100 | 50-100 | 1X or 2X |
Lambda DNA
0.7%琼脂糖
28 切割位点
50 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 100 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 200 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.15% Triton X-100, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
备注
- 低盐、高浓度甘油、高pH值或8% DMSO会导致星活性(Malyguine, et al., Gene, 8, 163-177, 1980)。
- 识别序列周围如果存在连续的G-C碱基对会极大地增加对酶切的抵抗性(Armstrong and Bauer, NAR, 10, 993-1007, 1982)。
- dUTP碱基100%渗入识别位点使PstI切割活性降低到25% (Glenn, et al., Biotechniques, 17, 1086-1090, 1994）。
- PstI不能切割经AluI转甲基酶甲基化处理的AGCTCGAG序列。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 无重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 无重叠 – 不影响。
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 0-20 | 50-100 | |||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 28 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 0 |
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文献和实验伤寒杆菌组氨酸转运操纵子为起点进行连续步行。以M13mpl8RF DNA 为载体。用PstI和AraI酶切基因组DNA ，PstI和XmaI酶切载体DNA ，然后连接基因组片段和载体片段，用根据基因组DNA 序列设计的特异引物和载体的通用引物进行扩增，由于非特异片段没有单特异引物结合的位点，即使有载体连到非特异片段，也无法得到大量扩增，而使特异片段得到有效扩增。 1.4.2 利用接头的PCR 王新国等利用衔接头的方法，设计了位于单链DNA 两端互补的颠倒末端重复序列，增加了反应的特异
Ligation of DNA fragments by homopolymer tailing
with the restriction endonuclease PstI (recognition site: CTGCAG) which will produce the 3’- extension TGCA at both termini. If the PstI digested vector DNA is then homopolymertailed with dGTP, and consequently the target DNA fragments are tailed with the complementary
Subcloning: restriction enzyme digests, ligation
diphosphates and triphosphates and selectivity identical to that of the wild-type receptor. Biochemical Pharmacology 59, 791-800). You will isolate a 1.4kb PstI-BamHI DNA fragment (insert) containing the amplified P2X2 sequence (that you generated using
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