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- Thermo scientific -fermentas
- ER0271
- 2025年09月27日
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X Buffer EcoRI | 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER0271 | 5000 u (10 u/µl) | 2 x 1.00 ml | 1.00 ml | ER0271 | |
| ER0272 | 5 x 5000 u (10 u/µl) | 5 x 1.00 ml | 1.00 ml | ER0272 | |
| ER0273 | HC, 25000 u (50 u/µl) | 5 x 1.00 ml | 1.00 ml | ER0273 | |
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| EcoRI | 37°C | 0-20 | NR | 100 | 100* | NR | 100 | 2X |
Lambda DNA
0.7%琼脂糖
5 切割位点
50 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 100 mM NaCl, 0.02% Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
10 mM磷酸钾 (pH 7.4, 25°C), 300 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.2 mg/ml BSA, 0.15% Triton X-100和50% �v/v)甘油。
备注
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 部分影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 不影响。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| CpG | 5'...m5C G AATTm5C G...3' |
部分影响 |
| EcoBI (TGA(N)8 TGCT) | 5'...TGm6AATTC(N)4 TGCT...3' |
不阻止酶切 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 50-100 | ||||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 5 | 0 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 1 | 1 | 1 | 1 | 0 | 1 |
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文献和实验wj1989113 最近在构建一个质粒。 根据我的目的基因序列，筛了两个酶切位点，而且只有这两个酶切位点能用，XbaI和EcoRI, 设计引物时XbaI 加了两个保护碱基，EcoRI 加了三个保护碱基。根据takara公司的说明，选择了共用Buffer1xM,酶切，连接，转化之后挑克隆，抽质粒酶切鉴定，发现都是空载体。网上说XbaI对甲基化敏感，有什么对策？因为我别无他选，只能用这两个酶。 不胜
酶的活性也是影响克隆成败的关键因素： 1）如果限制性内切酶因为保管不当，导致酶失活或部分失活，那么依据DDDesigner计算出来的酶量就不能保证完全酶切。 2）如果制备的质粒DNA的质量不好（如细菌培养时间过长，质粒制备时裂解不充分或裂解时间过长等），那么对这种质粒DNA进行酶切时，即使酶活性正常，酶量足够，也不能实现完全酶切，因为其中很多质粒DNA已经变性，不能被切开。 下面是一个简单的实验设计，可以用于分析各种可能的问题。 如:拟用NEB的EcoRI
用于克隆筛选).因为引物上带了EcoRV位点,又可以进一步做成T载体,再把基因克进去,如此反复... 关键是T载体要制备的好，筛选的时候多挑几个克隆,如果需要定向克隆基因的话可利用载体上的引物筛选之,然后利用基因内部合适的酶切位点来验证... 欢迎交流! qianjing930 我做过三段重复片段的串联,用的是pBV220载体. 第一对引物为EcoRI_KpnI_____BamHI;第一段单体插入pBV220载体中的EcoRI
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