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RiboLock™ RNase Inhibitor

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  • 2025年10月15日
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    • - 热失活75°C, 10 min
    • - 重组酶
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Certificate of Analysis MSDS
    EO0381 2500 u (40 u/µl) EO0381
    EO0382 4 x 2500 u (40 u/µl) EO0382
    EO0387 400 u (40 u/µl)
    Features

    • 应用范围广,适合多种使用条件。
    • 保护RNA,使其免受降解。最高有效温度达55°C。
    Applications

    • 抑制RNA降解,应用如下:
      一 体外转录(1);
      一 cDNA合成(2);
      一 体外翻译(3);
      一 分离含有mRNA-蛋白复合物的哺乳动物细胞组分(3);
      一 RNA扩增(4)。
    • RNA纯化和保存。
    • 分离和鉴定特殊的核酸酶活性(5)。
    • 肿瘤抑制研究(6)。
    说明
    Ribolock™ RNase Inhibitor按1:1比例非竞争性与RNases A(见图1)、B和C结合,从而抑制RNases A、B和C的活性。但是其不能抑制真核生物RNases T1、T2、U1、U2、CL3和原核生物RNases I和H的活性。

    来源
    大肠杆菌菌株,含有编码哺乳动物核酸酶抑制剂的克隆基因。

    分子量
    49.6 kDa,单体。

    活性单位定义
    1个活性单位是指50%抑制5�ng RNase A活性所需Ribolock™ RNase Inhibitor用量。

    抑制剂活性分析混合物:100 mM Tris-HCl (pH 7.5), 1.2 mM EDTA, 0.1 mg/ml BSA, 100 ng/ml RNase A, 0.1 mg/ml [3 H]-RNA, 50 mg/ml酵母RNA, 8 mM DTT。


    保存缓冲液
    保存缓冲液组分:
    20 mM HEPES-NaOH (pH 7.5), 50 mM NaCl, 8 mM DTT, 0.5 mM ELUGENT变性剂和50% (v/v)甘油。

    质量控制
    相关测试表明无内切或外切脱氧核糖核酸酶、磷酸酶、核糖核酸酶污染。功能测试方法为RNA和cDNA的合成。

    抑制与失活
    • 抑制剂:常用变性剂(SDS、尿素)和所有氧化剂(对-氯汞基苯甲酸盐、溶解氧、高氧化状态的离子)可强烈抑制RiboLock™ RNase Inhibitor并释放被结合的RNase。
    • 失活:75°C加热10分钟;70°C加热10 分钟仍然可检测到活性残留。

    备注
    • 保存缓冲液中的DTT可确保Ribolock™ RNase Inhibitor长期保存的稳定性,其 并非抑制剂活性发挥的必需品。
    • 推荐浓度 – 1 unit/μl/μlμl反应体系。


    图1。Ribolock™ RNase Inhibitor对RNase A的抑制效果分析。
    37°C时,人RNA (1�μg)中添加20 u Ribolock™ RNase Inhibitor和不同量的RNase A(不含DNase和蛋白酶,#EN0531)。
    M – RiboRuler™ High Range RNA Ladder
    C1 – 人总RNA
    C2 – 人总RNA,含RNase A
    1-4 – 人总RNA,含RiboLock™ Ribonuclease Inhibitor和RNase A
    图2。Ribolock™ RNase Inhibitor热稳定性。
    人的总RNA (1�μg)中添加20 u Ribolock™ RNase Inhibitor和50 pg RNase A(不含DNase和蛋白酶,#EN0531),不同温度条件下孵育。
    M – RiboRuler™ High Range RNA Ladder
    C1 – 人总RNA
    C2 – 人总RNA,含RNase A
    1-5 – 人总RNA,含RiboLock™ Ribonuclease Inhibitor和RNase A

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