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- Thermo scientific -fermentas
- EO0381
- 2025年10月15日
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大量
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| Catalog# | Size, concentration | Certificate of Analysis | MSDS |
| EO0381 | 2500 u (40 u/µl) | EO0381 | |
| EO0382 | 4 x 2500 u (40 u/µl) | EO0382 | |
| EO0387 | 400 u (40 u/µl) |
- Features
-
- 应用范围广，适合多种使用条件。
- 保护RNA，使其免受降解。最高有效温度达55°C。
- Applications
-
- 抑制RNA降解，应用如下：
一 体外转录(1)；
一 cDNA合成(2)；
一 体外翻译(3)；
一 分离含有mRNA-蛋白复合物的哺乳动物细胞组分(3);
一 RNA扩增(4)。 - RNA纯化和保存。
- 分离和鉴定特殊的核酸酶活性(5)。
- 肿瘤抑制研究(6)。
- 抑制RNA降解，应用如下：
说明
Ribolock™ RNase Inhibitor按1:1比例非竞争性与RNases A(见图1)、B和C结合，从而抑制RNases A、B和C的活性。但是其不能抑制真核生物RNases T1、T2、U1、U2、CL3和原核生物RNases I和H的活性。
来源
大肠杆菌菌株，含有编码哺乳动物核酸酶抑制剂的克隆基因。
分子量
49.6 kDa，单体。
活性单位定义
1个活性单位是指50%抑制5 �ng RNase A活性所需Ribolock™ RNase Inhibitor用量。
抑制剂活性分析混合物：100 mM Tris-HCl (pH 7.5), 1.2 mM EDTA, 0.1 mg/ml BSA, 100 ng/ml RNase A, 0.1 mg/ml [3 H]-RNA, 50 mg/ml酵母RNA, 8 mM DTT。
保存缓冲液
保存缓冲液组分：
20 mM HEPES-NaOH (pH 7.5), 50 mM NaCl, 8 mM DTT, 0.5 mM ELUGENT变性剂和50% (v/v)甘油。
20 mM HEPES-NaOH (pH 7.5), 50 mM NaCl, 8 mM DTT, 0.5 mM ELUGENT变性剂和50% (v/v)甘油。
质量控制
相关测试表明无内切或外切脱氧核糖核酸酶、磷酸酶、核糖核酸酶污染。功能测试方法为RNA和cDNA的合成。
抑制与失活
- 抑制剂：常用变性剂(SDS、尿素)和所有氧化剂(对-氯汞基苯甲酸盐、溶解氧、高氧化状态的离子)可强烈抑制RiboLock™ RNase Inhibitor并释放被结合的RNase。
- 失活：75°C加热10分钟；70°C加热10 分钟仍然可检测到活性残留。
备注
- 保存缓冲液中的DTT可确保Ribolock™ RNase Inhibitor长期保存的稳定性，其 并非抑制剂活性发挥的必需品。
- 推荐浓度 – 1 unit/μl/μlμl反应体系。
图1。Ribolock™ RNase Inhibitor对RNase A的抑制效果分析。
37°C时，人RNA (1 �μg)中添加20 u Ribolock™ RNase Inhibitor和不同量的RNase A(不含DNase和蛋白酶，#EN0531)。
M – RiboRuler™ High Range RNA Ladder
C1 – 人总RNA
C2 – 人总RNA，含RNase A
1-4 – 人总RNA，含RiboLock™ Ribonuclease Inhibitor和RNase A
37°C时，人RNA (1 �μg)中添加20 u Ribolock™ RNase Inhibitor和不同量的RNase A(不含DNase和蛋白酶，#EN0531)。
M – RiboRuler™ High Range RNA Ladder
C1 – 人总RNA
C2 – 人总RNA，含RNase A
1-4 – 人总RNA，含RiboLock™ Ribonuclease Inhibitor和RNase A
图2。Ribolock™ RNase Inhibitor热稳定性。
人的总RNA (1 �μg)中添加20 u Ribolock™ RNase Inhibitor和50 pg RNase A(不含DNase和蛋白酶，#EN0531)，不同温度条件下孵育。
M – RiboRuler™ High Range RNA Ladder
C1 – 人总RNA
C2 – 人总RNA，含RNase A
1-5 – 人总RNA，含RiboLock™ Ribonuclease Inhibitor和RNase A
人的总RNA (1 �μg)中添加20 u Ribolock™ RNase Inhibitor和50 pg RNase A(不含DNase和蛋白酶，#EN0531)，不同温度条件下孵育。
M – RiboRuler™ High Range RNA Ladder
C1 – 人总RNA
C2 – 人总RNA，含RNase A
1-5 – 人总RNA，含RiboLock™ Ribonuclease Inhibitor和RNase A
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