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- Thermo scientific -fermentas
- EP0451
- 2025年10月15日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS |
| 5X Reaction Buffer | ||||
| EP0451 | 10,000 u (200 u/µl) (for 50 reactions of 20 µl) |
1.00 ml | EP0451 | |
| EP0452 | 5 x 10,000 u (200 u/µl) (for 250 reactions of 20 µl) |
5 x 1.00 ml | EP0452 | |
| EP0457 | 2000 u (200 u/µl) | 1.00 ml |
- Features
-
- 高产量制备全长的第一链cDNA，最长可达13 kb。
- 42-45°C范围具有最佳活性。
- 温度高达55°C时仍有活性。
- 合成掺入修饰核苷酸，如Cy3-、Cy5-、罗丹明-、氨基-、荧光-标记的核苷酸。
- Applications
-
- 第一链cDNA合成，用于RT-PCR和实时RT-PCR (3, 4, 5)。
- 可提高反应温度，降低二级结构对逆转录的影响。
- 合成cDNA，用于克隆和表达研究。
- 制备芯片用标记的cDNA探针(6)。
- DNA标记(3)。
- 引物延伸法分析RNA (3)。
说明
RevertAid™ H Minus Reverse Transcriptase (RT)是一种遗传修饰的M-MuLV RT，其与M-MuLV RT的结构和催化特性不同。该酶具有RNA和DNA依赖的聚合酶活性，但是却没有RNase H活性(该活性区域点突 变)(1, 2)。该酶不能降解第一链cDNA合成时形成的RNA-DNA复合物中的RNA，因此可获得全长的cDNA。
RevertAid™ H Min Reverse Transcriptase在宽的温度范围(42-55°C)内有酶活性，因此适合逆转录具有较多二级结构的RNA分子。
来源
大肠杆菌细胞(含有突变的基因pol )。该基因编码小鼠白血病病毒逆转录酶。
分子量
76.1 kDa，单体。
活性单位定义
1个活性单位是指在37°C、10分钟内将1 nmol dTMP合成掺入多聚的核苷酸片段(吸附在DE-81上)所需的酶量。
酶活性分析混合物：50 mM Tris-HCl (pH 8.3), 4 mM MgCl2 , 10 mM �TT, 50 mM KCl, 0.5 mM dTTP, 0.4 MBq/ml [3 H]-dTTP, 0.4 mM �olyA・oligo(dT)12-18 。
保存缓冲液
保存缓冲液组分：
50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 M NaCl, 1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0.1% (v/v) Triton X-100和50% (v/v)甘油。
50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 M NaCl, 1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0.1% (v/v) Triton X-100和50% (v/v)甘油。
5X 反应缓冲液
250 mM Tris-HCl (pH 8.3, 25°C), 250 mM KCl, 20 mM MgCl2 , 50 mM DTT。
质量控制
相关测试表明无内切和外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。 功能测试：第一链cDNA合成和RT-PCR。
抑制与失活
- 抑制剂：金属螯合剂、无机磷酸盐、焦磷酸和多胺(2)。
- 失活：70°C加热10分钟。
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RevertAid™ H Minus Reverse Transcriptase
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