说明
RevertAid™ Reverse Transcriptase (RT)是遗传修饰的M-MuLV RT,其与M-MuLV RT的结构和催化特性。该酶具有RNA和DNA依赖的聚合酶活性和RNase H 活性(1, 2)。该酶的RNase H活性比禽类成髓细胞瘤逆转录酶(AMV)低很多(1, 2)。
来源
含有克隆基因pol 的大肠杆菌细胞。该基因编码小鼠白血病病毒逆转录酶。
分子量
76.1 kDa,单体。
活性单位定义
1 个活性单位是指在37°C、10分钟内将1 nmol dTMP合成掺入多聚的核苷酸片段(吸附在DE-81上)所需的酶量。
酶活性分析混合物:50 mM Tris-HCl (pH 8.3), 4 mM MgCl2, 10 mM �TT, 50 mM KCl, 0.5 mM dTTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP, 0.4 mM �olyA・oligo(dT)12-18。
保存缓冲液
保存缓冲液组分:
50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 M NaCl, 1 mM �DTA, 5 mM DTT, 0.1% (v/v) Triton X-100和50% (v/v)甘油。
5X 反应缓冲液
250 mM Tris-HCl (pH 8.3, 25°C), 250 mM KCl, 20 mM MgCl2, 50 mM DTT。
质量控制
相关测试表明无内切和外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。 功能测试:第一链cDNA合成和RT-PCR。
抑制与失活
- 抑制剂:金属螯合剂、无机磷酸盐、焦磷酸和多胺(2)。
- 失活:70°C加热10分钟。