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免疫共沉淀（IP-MS鉴定）
- 提供商：
北京青莲百奥生物科技有限公司
产品简介
分子间互作尤其是蛋白-蛋白互作（PPI）始终是深入探究细胞信号通路的重难点。利用LC-MS/MS蛋白鉴定技术对IP、co-IP、pull-down等纯化溶液样本进行蛋白鉴定，得到与目标蛋白相互作用的一系列蛋白质再通过后续检测方法验证目标蛋白的互作蛋白是目前最行之有效的策略之一。
样本要求
IP / Co-IP / Pull-down样本 蛋白洗脱液要求蛋白总量＞5μg，蛋白溶液进行SDS－PAGE电泳，下方两种电泳方式任选其一即可：
蛋白洗脱液，跑分离胶5cm（不含浓缩胶的SDS－PAGE），切下5cm胶条，放入1.5ml离心管中。
蛋白洗脱液，跑SDS－PAGE标准的胶，切下目标条带即可，放入1.5ml离心管中。
未做变性的溶液干冰寄送，胶条4度保存常温寄送。
鉴定周期
样本质检合格后，2周
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文献和实验一、原理：免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。 目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads
—— co-IP 检测 Hsp90 与 Cdc37 结合情况1、实验材料SKBR3 细胞，PMSF（Amresco，cat:329-98-6），cocktail（上海晶莱生物），脱脂奶粉（cat:66196131T），β-actin（上海晶莱生物）。Anti-Hsp90(santa,cat:sc-69703)、Anti-Cdc37(santa,cat:sc-13129)、Protein A+G agrose(Beyotime)，细胞刮，4 度离心机（eppendorf，centrifuge
一、原理：免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads
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