双荧光素酶验证miRNA与靶目标基因结合位点

双萤光素酶报告基因检测系统中含有在同一细胞中同时表达的两种萤光素酶。通常，报告基因实验中往往会受到各种实验条件的影响，共转染的“对照”报告基因会作为内参，为实验提供一基准线。实验报告基因经过内参照的处理可以减小细胞活性和转染效率对实验的影响，因此双报告系统减少了外部干扰，使得实验数据更可信。实验中报告基因和对照基因的酶没有种源同源性，萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶对应不同的反应底物，反应中没有任何的交叉干扰。利用双萤光素酶报告基因检测系统可以对miRNA与靶目标基因结合位点，转录因子与启动子结合位点提供验证服务。

由于miRNA主要通过作用于靶基因的3’UTR起作用，可以将目的基因3’UTR区域构建至载体中报告基因luciferase的后面， 通过比较过表达或者干扰miRNA后，报告基因表达的改变（检测萤光素酶的活性变化）可以定量反映miRNA对目的基因的抑制作用；结合定点基因突变等方法进一步确定miRNA与靶基因3’UTR的作用位点。

上海生博提供：miRNA靶基因报告载体构建服务，并可进一步为您提供双萤光素酶报告基因检测实验服务。