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- 由于miRNA主要通过作用于靶基因的3’UTR起作用，可以将目的基因3’UTR区域构建至载体中报告基因luciferase的后面， 通过比较过表达或者干扰miRNA后，报告基因表达的改变（检测萤光素酶的活性变化）可以定量反映miRNA对目的基因的抑制作用；结合定点基因突变等方法进一步确定miRNA与靶基因3’UTR的作用位点
- 2026年01月18日
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双荧光素酶验证结合位点
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上海生博生物医药科技有限公司
由于miRNA主要通过作用于靶基因的3’UTR起作用，可以将目的基因3’UTR区域构建至载体中报告基因luciferase的后面， 通过比较过表达或者干扰miRNA后，报告基因表达的改变（检测萤光素酶的活性变化）可以定量反映miRNA对目的基因的抑制作用；结合定点基因突变等方法进一步确定miRNA与靶基因3’UTR的作用位点。
上海生博提供：miRNA靶基因报告载体构建服务，并可进一步为您提供双萤光素酶报告基因检测实验服务。
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文献和实验信息学的方式进行，主要是根据以下几个方面进行预测：①miRNA与靶基因结合位点的互补性；②miRNA靶位点在不同物种之间的保守性；③miRNA-mRNA结合的热稳定性；④miRNA靶位点处不应有复杂二级结构；⑤miRNA5′端与靶基因的结合能力强于3′端。除以上几个基本原则外，不同的预测方法还会根据各自总结的规律对算法进行不同的限制与优化。目前比较常用的靶基因预测软件有：miRanda、TargetScan、PicTar、miRWalk、miRanda、miRDB等，其中在miRWalk中可以查找到已经
-4 and let-7被认为是通过不完全互补结合到目标靶mRNA3'非编码区端，以一种未知方式诱发蛋白质翻译抑制，进而抑制蛋白质合成，阻断mRNA的翻译。多个果蝇miRNAs也被发现和他们的目标靶mRNAs的3'非编码区有部分同源。由于miRNAs和其潜在的目标靶之间并非完全互补，这使得通过信息学的方法鉴定miRNA的目标靶位点变得困难。因而也无法确定miRNAs的作用方式是什么，以何种机制影响的翻译，以何种方式调控基因表达。miRNAs的作用目标靶和活性机制一直是各地的研究人员的关注热点。 在植物中目前有一个
信号和超高的信噪比，本系统被广泛用于miRNA靶基因 验证。 转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达 功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式因子，转录因子的DNA结合域和顺式因子实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。萤光素酶报告基因实验(luciferase Assay)是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段，其原理简述如下： (1)用靶启动子的特定片段替换
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