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双萤光素酶报告基因分析系统是结合萤火虫和海洋腔肠萤光素酶先进的共报告基因测试技术:pRL家族海肾萤光素酶(Rluc)载体提供组成性表达的海肾萤光素酶,可与一个萤火虫萤光素酶载体联合共转染哺乳动物细胞。海肾萤光素酶的表达为使实验的萤火虫萤光素酶报告基因正态化提供内对照值。pRL载体包含一个编码海肾萤光素酶(Rluc)的cDNA,这个cDNA从珊瑚虫类腔肠动物海肾(Renilla reniformis)中克隆而来。目前有四个不同的启动子载体。其中HSV-胸腺嘧啶核苷激酶启动子(pRL-TK)相对较弱,在提供海肾萤光素酶报告基因载体的组成性表达时特别有用。早期SV40 增强子/启动子区域(pRL-SV40)和CMV极早期增强子/启动子区域(pRL-CMV)一般提供高水平转录,适用于实验载体带有较弱调节因子的报告基因实验。
启动子、增强子报告基因表达载体构建
构建将启动子、增强子的特定片段插入到萤火虫萤光素酶表达序列上游的报告基因质粒 ,可以方便的定量检测启动子序列的活性。
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文献和实验janetlee1976 在构建萤光素酶报告基因载体的过程中,我把一个基因的一部分启动子插入到载体中(包含该基因转录起始点),请问是否需要为了避免载体中编码萤光素酶的基因的移码突变,而在转录起始点以下所包含的碱基数必须为3的整倍数呢?比如所包含启动子区域为-1000!~+27(此处是否必须为3的整倍数) woxingwosu 我觉得只要从翻译开始,即ATG, 保持碱基数必须为3的整倍数就可以了。前面的启动子部分没有必要。最好
【求助】关于构建目的基因启动子序列的虫荧光素酶报告基因重组质粒的问题请教
。 wangqidl 您好!我刚好做过你所要进行的工作,有几点可以和你交流: 1、你可以首先进行核因子的Real time PCR和Western blot,证实的确是在转录水平进行调控的,然后才有必要也必须进行启动子水平的研究。如果不是在转录水平进行的,做启动子报告基因检测是没有意义的。因为基因表达调控不仅仅只在转录水平才能发生。 2、启动子报告基因载体很多公司都有卖的。自己构建也很简单,你只需要在NCBI里边找到核因子转录起始位点之前的大约2000bp和起始
水仙子2005 我想分别构建FOXO1 和 SIRT1基因启动子/luciferase报告质粒,用于研究X基因是否能够调控这两个启动子。但是不知道该扩增两个基因启动子区域的哪一段插入pGL3(promega)中。 另外,promega的pGL3有pGL3-basic和pGL3-enhancer,该选择哪个? 水仙子2005 继续求助 sxd5266 pGL3-basic 没有SV
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